摘要

发芽鹰嘴豆脲酶的部分纯化及特性研究种子

作者(年代):Niranjan Kumar Sana, Sahela Pervin, Md. golam Sarowar Jahan, Md. Masudul Hasan Khan, Md. Rezaul Karim, Bidhan Chandra Sarkar, Ranajit Kumar Shaha

在发芽鹰嘴豆(Cicer arietinumL.)种子中发现了丰富的尿素水解酶脲酶。酶经20%丙酮萃取、50%丙酮分馏、Sephadex G-200凝胶过滤、deacellulose层析等步骤纯化至均质。纯化倍数为44.99，最终比活性为489.57mMmin-1mg-1。纯化的脲酶是相同亚基的六聚体。天然酶的分子质量为510 kDa(凝胶过滤，Sephadex G-200)，而用十二烷基硫酸钠PAGE测定的亚单位值为85 kDa。以尿素为底物，纯化脲酶的最适pH值为7.2，最适温度为480C。在50 mM磷酸盐缓冲液(pH7.2) 40℃下，脲酶的半衰期为30天。纯化脲酶对尿素的Kmvalue为3.1mM。在700℃下，5分钟内脲酶活性下降50%。脲酶的最佳底物(尿素)浓度为25 mM，在480C下孵育30 min时酶活性最高。Ca2+能使脲酶活性提高120.47%，而Pb2+、Cu2+、Zn2+和Hg2+几乎完全抑制脲酶活性。