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简要综述高效液相色谱法,其操作和应用程序

*通信:

Sneha辛格班加罗尔大学生物学系,班加罗尔,印度,电子邮件:snehasingh@gmail.com

介绍

高效液相色谱法(高效液相色谱),曾经在过去提到为高压液体色谱法,是科学科学的方法用于隔离,识别和测量相结合的每一部分。这取决于文裕章通过压缩流体通过一个包含示例中可溶解的组合段加载了一个很强的吸附剂材料。每一部分的例子有些多样化通信吸附剂材料,造成独特的流率的各个部分和促使部分的分离流的部分。高效液相色谱法已用于组装(如创建交互中药物和天然物品),合法的(例如,确定执行改进药物小便),研究(例如,孤立的部分一个复杂的有机的例子,或者从另一个比较制造合成化合物),和临床(例如,认识到营养在血清D水平)的目的。

色谱分析可以描述为一个质交换过程包括吸附。高效液相色谱法取决于文裕章通过压缩流体和一个例子通过部分加载与吸附剂结合,促使部分分离的例子。动态段的一部分,吸附剂,通常是一种粒状材料制成的强大的粒子(如二氧化硅、聚合物,等等),2-50μm大小。的部分例子混合彼此隔绝,因为各级协会的吸附剂颗粒。定期压缩流体溶剂的组合(例如,水、乙腈和甲醇),提到“便携式阶段”。它的块和温度假设在分区周期的一个重要组成部分,影响测试部分和吸附剂之间的连接发生。这些通信物理性质,例如,疏水性(分散),取向和离子,经常混合。

高效液相色谱仪器定期结合了脱气装置的示意图,取样器,虹吸管,仪。取样器带来的例子相结合的多功能阶段流传递到部分。文裕章传达理想流和结构的多功能通过细分阶段。指标产生一个信号相对于测量测试上升段的一部分,因此考虑定量调查的部分例子。一个先进的微芯片和客户端编程控制高效液相色谱仪器和提供信息的调查。几个型号的机械文裕章在高效液相色谱仪器可以结合许多溶剂作为一个比例改变,生产一块角在通用的阶段(1]。不同的定位器一样使用,比如UV / Vis、光电二极管集群(PDA)或针对质谱分析。最高效液相色谱仪器同样一段炉,考虑温度变化的超然。

操作

被孤立和调查的例子是,在一个离散的小体积(通常每毫升),便携式的激增阶段渗透段。例穿越段的部分在不同的速度,这是一个组件明确实际的关联与吸附剂(此外称为固定阶段)。每一部分的速度依赖于其复合性质,舞台上固定的想法(段)和多才多艺的创建阶段。一个特定的分析物的时间洗提(上升段)其维修时间。维修时间估计在特定的条件下是区分正常的对于一个给定的分析物(2]。

各种类型的段都可以访问,加载了吸附剂转移分子的大小,孔隙度和表面科学。更温和分子大小按材料的利用率,需要利用高功能张力(“背压”)和定期在色谱工作目标(顶峰的水平分区之间的连续分析物引起的部分)。在本质上可能是疏水或极性吸附剂颗粒。

正常便携式阶段利用任何混相结合的混合水与不同自然溶剂(最著名的是乙腈和甲醇)。一些高效液相色谱程序使用无水便携式阶段(见色谱法在普通阶段)。便携式舞台的液体部分可能包含酸,(例如,甲,磷酸或三氟醋酸的腐蚀性)或盐援助的分区部分例子。便携式的阶段可能会保持稳定(“权力平等主义的洗脱模式”)或波动(“倾向洗脱模式”)在色谱调查。权力平等主义的洗脱一般成功的分区测试部分是完全不同的喜欢固定的阶段。在斜坡洗脱一般通用的阶段是不同的结构低洗脱强度高。便携式阶段反映的洗脱强度分析物维修时间和洗脱强度高创建快速洗脱(=短暂维护时间)。平均斜率在转过身的阶段色谱法会在5%乙腈(水或缓冲液)和进步直95%乙腈做多分钟。次创建稳定的通用的阶段可能是必不可少的任何倾向剖面。例如,便携式舞台安排可能保持一致在5%乙腈为1 - 3分钟,落后的直接改变95%乙腈。

选择创建通用的阶段依赖于不同的例子部分之间协作的力量(分析物)和固定阶段(例如,疏水性通信在转换阶段高效液相色谱法)。取决于他们喜欢固定的阶段,分析物包裹两个在分区之间的循环发生在段。这个划分系统就像发生在流体萃取不过是一致的,不精明。在这个模型中,利用水/乙腈的斜坡,更多的疏水部分将洗提(脱落部分)晚,当便携式舞台变得更加用乙腈(即。,在一个通用的洗脱强度高)[3]。

便携式阶段的决定部分,添加物质(如盐或酸)和倾角条件依赖于部分的概念和测试部分。定期执行进展的初步尝试与例子来观察高效液相色谱策略使足够的分区。

应用程序

1。高效液相色谱法有许多应用程序在两个研究中心和临床科学。这是一个意料之中的策略用于药物发展,因为它是一个可靠的方法获取和保证产品纯度。而高效液相色谱法可以提供非常优秀的(纯粹的)项目,这不是值得信任地大规模药物治疗的基本技术用于创建材料。

2。这个过程同样用于非法药物的位置在撒尿。最广泛认可的药物识别策略是一种免疫测定。这种技术大大更有帮助。尽管如此,舒适为代价的特殊性和包容的范围广泛的药物。作为高效液相色谱技术决定,可以扩大immaculateness,利用高效液相色谱法在评估药物是相当缺乏的收敛性。,高效液相色谱法在此设置定期与质谱分析。

3所示。比较测试可以执行为研究目的,确定集中的潜在临床申请者的敌人传染性和哮喘药物。这种策略显然有助于发现无数物种在收集的例子,然而数据时需要利用标准安排物种性格是考查。肯定的后果是用作战略融合反应,这种immaculateness是基本的考试。尽管如此,质量光谱法是作为识别物种。然而,更可靠的方法

4所示。临床利用高效液相色谱法可以将药物调查,然而瀑布更加专心地类下的补充检查。虽然尿是最广泛认可机制调查药物固定,血清收集的例子是对大多数临床检查与高效液相色谱法。其他的原子位置的技术有助于临床调查被试对高效液相色谱法,具体分析。在这方面的一个例证,残酷的蛋白质限制检查(CPBA)和高效液相色谱法分析发现易感性的营养D [4]。

引用

1. Romling U, Simm c-di-GMP信号r .流行的概念。细菌的传感和信号。2009;16:161 - 81。
2. Sondermann H, Shikuma新泽西,Yildiz跳频。截短形式的标题:c-di-GMP信号机制。当今Microbio。2012; 15 (2): 140。
3. 罗斯P, Weinhouse H, Aloni Y, et al。监管xylinum醋菌的纤维素合成循环diguanylic酸。大自然。1987;325 (6101):279 - 81。
4. Schirmer C-di-GMP合成:进化的结构方面,催化和监管。J摩尔生物。2016;428 (19):3683 - 701。