原文
，卷:12(2)

• 查看PDF
• 下载

利用真菌生物防治自然资源对常用化学农药的公平性进行控制

*通信:

Snehal F那格浦尔大学(MH)微生物学系。印度，电话:07152252528;电子邮件:(电子邮件保护)

摘要

背景:土壤中产生的微生物具有致病性，其防治是农业生产中重要的环节，其防治是建立在一定基础上的真菌生物电控制代理。因此，通过检测分离出的真菌对植物病原菌的生物防治活性，对污染土壤中真菌的分离鉴定是评价自然资源的关键。同时，确定了农药对真菌生物电控制代理。

目的:确定的公差真菌生物防治资源是防治土壤传播植物病原菌的常用化学农药。

方法:土壤样品用历史重复使用化学农药，然后在无菌蒸馏水中连续稀释土壤样品。将土样倒在PDA板上。这些板在24°C下孵育2至4天。的真菌物种对其进行了鉴定，并根据形态学特征进行了显微分析。然后对分离出的真菌进行生物防治活性检测。

结果:生物防治剂在减少土壤源性植物病原菌方面取得了很好的效果。只有混合使用生物防治剂才能发现这种效果。它与廉价杀菌剂如多菌灵，代森锰锌的使用有关这些通常由农民在他们的农场中使用低剂量。

关键字

土壤病原体;农业;真菌;化学杀虫剂;微观分析;生物防治剂

简介

印度以农业耕作闻名，因此植物病原体是目前的主要问题，农民们也受到了这个问题的困扰。有一些科学家研究真菌和细菌的生物防治剂，这与六种农药有关，经常用于控制土壤传播的植物病原体。就像真菌（木霉属harzianum,木霉属液对而且Pochonia chlamydosporia)和细菌生物防治剂(枯草芽孢杆菌而且荧光假单胞菌)用于对抗六种农药，即多菌灵、代森锰锌、甲霉灵、卡普坦、美拉姆和尼马瑟，印度农民在农业实践中经常使用这些农药来控制土壤传播植物病原体［1］．

隔离各种真菌菌株是由受农药污染的农业土壤产生的。的发生真菌从受农药污染的农业土壤中提取的菌种按23个土壤样品分类。59岁的真菌采用不同的分离鉴定方法对33株真菌进行了鉴定。土壤样本的理化性质亦作了表征[2］．

科学家从农业土壤中分离出灭多威和羧呋喃降解细菌，并在斯普利特河谷和肯尼亚中部进行了分类。此外，他们使用农药在保护农民的种子、堆肥和劳动力投机方面仍然非常严重，因为它们提供了一个可靠的保护，免受害虫的损害。杀虫剂的使用，环境污染由于农药及其残留问题，将继续成为一个挑战。在这项研究中，分离出能够降解灭多威(s -甲基- n -[(甲基氨甲酰)氧基]-硫代乙酸酯)和羧呋喃(2,3 -二氢- 2,2 -二甲基-7-苯并呋喃基甲基氨基甲酸酯)的菌株[3.］．

一些科学家通过从农业土壤中分离出毒死蜱耐药菌，对其分离、鉴定和耐药概况及生长动力学进行了适当的综述。尽管使用农药有好处，但也有缺点，例如对人类和其他动物的潜在毒性，以及由于残留效应而改变生态平衡。三个分离株即，嗜热硬脂芽孢杆菌，环状芽孢杆菌而且芽孢杆菌macerans对50 mg/L、55 mg/L和60 mg/L毒死蜱有抗性[4］．

连续两年(1999-2000年和2000-2001年)在乌代普尔的粘土壤土上进行了田间试验，研究了乌代普尔磷矿和FYM培养源对小麦-玉米种植序列土壤的残留效应。评价了26个处理，3个乌代普尔磷矿来源(URP 18%、31%和34%)，4种培养方法(不培养、溶磷细菌培养、农家肥培养和农家肥+溶磷细菌培养)和2个农家肥水平(0和10 t ha)，以及2个检查(40和60 kg P O ha通过DAP) [5］．

木霉属SPP在土壤生成控制中起着关键作用植物病原体在…中大量使用的是什么农业为控制疾病和提高农产品质量[6］．

一百四十六株木霉属从甘肃中部地区分离得到土豆根际土壤植物。仅用双重培养技术鉴定。他们还研究了对抗镰刀菌素sambucinum，这与土豆干根病。从形态特征和分子分析结果来看，其中10株菌株对该病原菌具有明显的拮抗作用。分离株已鉴定为木霉属harzianum瑞福爱,木霉属longibrachiatum瑞福爱,木霉属atroviride Karsten和木霉属液对这就是拮抗作用。在这些菌株中，D-3-1 (t . longibrachiatum)对生长的抑制作用最强镰刀菌素sambucinum［7,8］．

木霉属物种只从土壤中分离出来，这是植物根系生态系统的一部分。真菌不仅足智多谋，还能帮助植物固定氮。它还有助于减少植物的一些疾病。到现在为止，我们已经知道了木霉是真菌物种它存在于土壤中。同时，还可作为强效生物杀虫剂、生物杀菌剂、生物杀菌剂[9-11］．

木霉属用于制备生物肥料，适用于所有农业土壤，包括森林腐殖质层和果园土壤。这些自由生活的丝状真菌与根、土壤和叶面环境相互作用。它们也是非常有用的生物肥料，有助于提高土壤质量。对另一种对农田有害的微生物也有一定的防治作用。的木霉属属型真菌，是一种能联合控制多种植物病原菌的真菌。它有几个应用。对植物病原菌有拮抗作用。同时对部分蔬菜作物的生长和产量也有积极作用[12,13］．

综上所述，本文的研究目的是确定的公差真菌生物防治剂是防治土壤传病植物病原菌的常用化学农药。因此，本文将为攻克土传植物病原菌问题提供有力的生物资源支持。

材料与方法

设备

仪器包括:Erlenmeyer烧瓶、摇床、高压灭菌器、培养皿、显微镜、载玻片和镊子。

媒体:土豆葡萄糖琼脂，sabouraud葡萄糖琼脂，CPZ琼脂。

化学成分:杀虫剂(多菌灵，代森锰锌)。

试剂:乳酚棉蓝。

方法

土壤样本采集:为分离真菌或天然生物防治资源，土壤样品采自不同区域的农民农田历史重复使用化学杀虫剂。

生物防治剂/自然资源的隔离

1.通过标准电镀技术进行隔离。

2.首先，用无菌蒸馏水连续稀释溶胶样品。

3.然后是浇在土豆葡萄糖琼脂板。

4.然后在24°C下孵育2至4天。

5.2天后，在PDA琼脂板上观察真菌菌落，其组成见(表1)．

表1。PDA组成。

真菌鉴定

鉴定是根据形态学特征进行的。其他标准是通过显微分析，使用分类学指南和标准程序。

染色法

乳酚棉蓝:

1.取棉蓝(苯胺蓝)0.05克配20毫升清水

2.加入苯酚晶体20克。

3.加入甘油40毫升。

4.加入乳酸20毫升

5.用20毫升蒸馏水将体积填满。

通过染色技术进行表征:

1.染色程序需要两天。

2.第一天，取蒸馏水，将棉蓝溶解在蒸馏水中，静置一晚，去除不溶水。

3.第二天，取玻璃烧杯;小心地在乳酸中加入苯酚晶体。继续使用磁力搅拌器，直到苯酚液化。

4.慢慢加入甘油。

5.将棉蓝和蒸馏水溶液过滤成苯酚/甘油/乳酸混合溶液，37°C保存。

基于形态特征的生物防治药剂的显微鉴别方法:

1.玻片清洗在这里是最重要的。

2.取一滴乳酚棉蓝。

3.像线一样真菌物种，分布在幻灯片上。

4.把盖子盖在上面。

5.在显微镜下观察。

生物防治活性检测

采用双培养技术检测了其生物防治活性。其中，测定了拮抗真菌与植物病原体之间的相互作用/重叠区。在培养皿PDA培养基上放置5毫米直径的带5日龄植物病原菌活性菌丝体的圆盘，并置于相反位置。

木霉属sp .为菌丝体。培养皿在28±1°C下孵育，每24小时检查一次，以计算拮抗剂与植物病原体首次接触的天数;LD乐动体育官网同时,真菌测量每个菌落的生长情况。综上所述，测量了交叉区域的直径。木霉属病原体不断过度生长，完全覆盖培养基表面。Bell等人(1982)进行了分类，其中，木霉属三分之二的培养基过度生长;例3,木霉属病原体在培养基表面大约一半的地方定植，既没有病原体也没有木霉属主导;病例4，病原体在至少2/3的表面定植并抵抗木霉属入侵;病例5，病原菌在整个培养皿表面定植。

观察与结果

隔离木霉属土壤样品中的sp

隔离的木霉属植物是从农业土壤中采集的。经过稀释技术后，一些稀释后的样品在28°C的PDA上放置2天，中心呈深绿色，如图所示(表2)．

表2。真菌鉴定。

双重培养技术

双重培养试验结果(图1)、挥发性代谢物和培养滤液木霉属sp .表明测试木霉属Sp.能抑制植物的生长镰刀菌素，所示(表3)．

表3。的影响Trichodermal预防镰刀菌。

木霉属可抑制植物的生长镰刀菌素．双重培养结果表明t . harzianum降低了菌丝的生长镰刀菌素51.4%，而t . viride抑制生长46.0%。挥发性代谢产物t . harzianum对病原菌的生长有38.1%的抑制作用t . viride减少生长镰刀菌素了35.8%。

的培养滤液t . harzianum而且t . viride的增长造成了明显的减少镰刀菌素但对病原菌均无杀灭作用。木霉属Sp.又能抑制生长假单胞菌syringie。A.尼日尔sp．能抑制生长吗芽孢杆菌．木霉属Sp.又能抑制芽孢杆菌的生长，如图所示图1．

除害剂的影响

的最大增长t . harzianum多菌灵、代森锰锌浓度分别为500、755 μg/ml时均有抑制作用。对应的值为t .液对多菌灵、代森锰锌浓度分别为405、625 μg/ml。杀菌剂浓度分别为60 μg多菌灵/ml、225 μg代森锰锌/ml时，对t .液对多菌灵的安全耐受限为40 μg /ml，代森锰锌的安全耐受限为177 μg /ml (表4)．生物防治细菌被发现比真菌对杀菌剂更耐受图2而且图1．

表4。治疗真菌物种关于常见的农药

相片画廊

孤立的木霉属Sp．形态特征的显微检查如图所示图3生物防治活性表现在图4-6而且图7．最重要的是农药的作用木霉属所示图8．

讨论

在这里，目前的研究清楚地表明，土壤耐受植物病原体能成功管理由木霉属可以寄生于真菌病原体和产生抗生素。同时，该菌具有多种良好的应用价值，对植物的生长、产量、养分吸收、提高肥料利用率、提高种子发芽率以及提高植物对病害的系统抵抗力都有良好的作用[14,15］．Cole和Zvenyika提出了这个建议f .以上烟草植株的侵染可以通过合并来控制t . harzianum到疾病管理程序(16］．Yedidia进行的一项研究报告称t . harzianum接种促进了植物在生长早期对营养物质的吸收[17］．

考虑了土壤理化性质与原始微生物丰富度之间的关系。土壤中的水分作为溶剂，对微生物的功能至关重要。一定程度的自然物质和湿度含量对于确保土壤中活跃的微生物种群的存在是必不可少的。在目前的研究中，农药对提高农业产量起着关键作用，但只有不到1%的农药足以杀死害虫，其余农药进入地下和地表水而引起环境污染［18］．因此，有些农药被禁止使用，有些则在不破坏环境的情况下进行了改良。然而，有机磷酸盐会产生很多健康问题(19］．存在于土壤和水中的各种细菌能降解许多杀虫剂。目前的调查涉及从各自的污染地点分离出耐污染物和耐污染物细菌。随着微生物由于细菌在生物修复中起着关键作用，因此通过实验从有机磷污染土壤中鉴定出具有降解有机磷能力的菌株。首先，为了研究，收集土壤样品并对其进行连续稀释。制备营养琼脂培养基和PDA肉汤。稀释后的土壤样品接种在PDA Petridis上。从Petridis中选取一个分离的菌落，然后将同一菌落接种到肉汤中。经4 ~ 6次传代培养，获得纯净、分离、单一的菌落。

本研究以土壤的理化性质为研究对象，用于微生物种类的分离。将土壤样品染成棕色至黑色:pH值介于7.82-8.65之间。土壤温度较高(30.2°C ~ 33.2°C)，含水率(0.35 ~ 0.95)、有机碳(0.2568 ~ 0.4125)和有机氮(0.2213 ~ 0.3555)差异较大。人们认识到土壤性质如有机质、pH值和水分含量等影响土壤中微生物的密度和多样性。因此，有必要研究土壤理化性质与大量原生微生物的关系。土壤中的水分作为溶剂，对微生物的功能至关重要。一定的有机物质和水分含量的最低水平对于确保土壤中活跃的微生物种群的存在是必不可少的。在这里，重要的物理化学财产的土壤，用于自然估价真菌浓度，已经确定。

结论

这项研究的结论是真菌从农场不同地区农药污染的土壤中分离出菌株。这些物种通过乳酚棉蓝染色对其进行了鉴定，并对其微观形貌进行了表征。一些真菌物种可以有效地生长，这意味着这些原始真菌有能力适应异种化合物作为新的生长和能源衬底。因此，这些真菌具有降解异种化合物的潜力，将在进一步的研究中对其降解常用农药进行测试。

在这里，在目前的研究中，明确证实，土壤承载植物病原体可以有效地通过生物防治剂/自然资源与廉价的杀菌剂(如多菌灵、代森锰锌)的联合应用来实现，这些杀菌剂在印度农民中经常使用低剂量。此外，农药在土壤中的污染不会影响生物防治剂的效果，因此可以很容易地与农药缀合应用于土壤传播的植物病原体的防治。

参考文献

1. Mohiddin FA，汗先生的宽容真菌并将细菌生物防治剂以六种常用的农药用于防治土传植物致病菌。Afr J Agric Res. 2013;8:5331-4。
2. 刘志强，王志强，王志强，等真菌纺织废水中用于生物修复的菌株。杨建平，2005;37:1013。
3. 张志强，张志强，张志强，等。东非大裂谷和肯尼亚中部园艺农场土壤灭多威和羧呋喃降解细菌的特征。环境科学学报。2012;6:104-14。
4. 萨维塔K，拉曼DS。班加罗尔农业土壤中毒死蜱耐药菌的分离鉴定、抗性谱及生长动力学。2 .中国生物科技，2012;
5. 胡晓明，王晓明，王晓明，等。乌代普尔磷矿源对土壤的残留效应生育能力小麦-玉米序列。水土保持学报，2014;
6. Bokhari NA, Perveen K。在体外抑制电位凤凰树．病原菌生长的提取物。J药用植物杂志2012;6:1083-8。
7. Nielsen KF, Gräfenhan T, Zafari D，等。毛孢烯生产由木霉属brevicompactum。农业化学学报。2005;53:8190-6。
8. samuel GJ, Dodd SL, Gams W，等。木霉属物种与商业种植的绿色霉菌流行有关双孢蘑菇．Mycologia。2002;94:146 - 70。
9. 布克CJ，贝德穆塔R，沃格尔T，等。利用流化床中试装置对烟叶热解生物油的杀虫、杀菌和杀菌性能进行了实验研究。工业工程化学，20101;49:10074-9。
10. 辛格HB，辛格BN，辛格SP，等。探索不同的途径木霉属作为一种有效的生物杀菌剂和植物生长促进剂-概述。乐动体育在线植物病理学杂志。2012;5:315-426。
11. Annadurai G, Rajesh Babu S, Mahesh KP，等。壳聚糖固定化恶臭假单胞菌(NICM 2174)对苯酚的吸附和生物降解。生物工程学报，2000;22:493-501。
12. Zaidi NW，辛格美国。Trichodermain植物健康管理。木霉属:生物学应用。2013:230。
13. 阿加索斯。”对抗微污染物的生物催化武器。环境工程学报。2012;11:S99-104。
14. 胡晓明，王晓明，王晓明，等。木霉属种:机会主义的，一种有毒的植物共生体。《微生物学》2004;2:43-56。
15. 哈曼通用电气。乐动体育在线的机制和用途概述木霉属spp．Phytopathol。2006;96:190-4。
16. 古铁雷斯WA，显示HD，梅尔顿TA。接种源和管理在温室条件下对烟草移栽植株的茄根丝枯菌的抑制作用。植物病害。1997; 81:604-6。
17. Sriram S, Manasa SB, Savitha MJ。诱导子的潜在用途木霉属在诱导全身性耐药为管理红辣椒中的辣椒疫霉菌中国生物防治杂志，2009;23(4):449-56。
18. 郭丽丽，王丽娟，等。有机磷降解细菌的分子特性。Int J Lifesc Bt & Pharm Res. 2012;1:64-72
19. 亚达夫，维尔马，乔杜里。从污染农业土壤中降解细菌的有机磷农药的分离与表征。中国生物医学工程学报(英文版);2015;