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用流动注射化学发光测定尿液中氯胺酮

*通信:

李雅生殖系基因家族,河北综合医院,石家庄050000年,中国,电话:86 - 85988701;电子邮件: (电子邮件保护)

文摘

一个简单、快速、敏感的流动注射化学发光(FL-Cl)方法测定了尿的克他命(KT);强烈的化学发光(CL)信号是当KT注入KMnO4的混合流泥在酸性介质。在优化条件下,该方法允许测量KT除以5.0 -600 ng mL-1相关系数为0.9987,与检出限为1.3 ng mL-1。相对标准偏差为50.0 ng mL-1 KT (n = 11)为3.2%。最优条件的检测KT是eval

关键字

化学发光;氯胺酮;高锰酸钾;亚硫酸钠;尿液

介绍

氯胺酮[2 - (2-chlorophenyl) 2-methylamino-cyclohexan-1-one] (KT),全身麻醉,在1962年首次合成作为替代模拟,苯环己哌啶(1]。最近,越来越多的研究表明,sub-anesthetic剂量的氯胺酮对快速、强劲、持久的抗抑郁作用和病人抑郁动物(2]。此外,它最初被医务人员由于其迷幻属性,并逐渐开始流行在年轻用户在跳舞和狂欢派对,被娱乐之一药物被称为“俱乐部毒品”(3,4]。因此,氯胺酮已包含在非法的筛选列表药物量化和许多其他滥用药物(5,6]。

不同的分析技术包括气体色谱法(GC) (3,7,8),电化学方法(9),动电的色谱法(EC) (10)和高效液相色谱法(高效液相色谱)11,12)曾KT测试。这些技术适用于测定样品和KT具有良好的敏感性。然而,GC经常需要化学衍生化。EC和高效液相色谱法分离和定量的优点不同形式的叶酸及其派生和最小干扰酶但涉及建立成本,一个复杂的提取和净化的过程。改性电极的使用寿命周期短。化学发光(CL)是一种现象,chemically-generated激发态分子发光。它已经吸引了相当大的关注等领域的临床研究,生物技术、药理学、环境化学和食品分析13- - - - - -15]。CL技术的吸引力在于其简单,快速,灵敏度高,低仪表和维护成本,不需要背景光。

本文发现KT能提高CL KMnO的信号₄与钠₂所以₃和CL强度依赖于KT浓度。基于这一现象,提出了一个新的、简单,敏感的方法对KT的决心。此外,一系列的参数影响CL进行了优化,验证的方法系统地研究了干扰。该方法已成功用于检测肯塔基州尿液样本与令人满意的结果。

实验部分

试剂和解决方案

KT是购自国家食品和药物控制机构(中国,北京),标准股票解决方案(0.1毫克毫升¹)准备水和存储在冰箱(4°C)。一个股票钠溶液₂所以₃(0.1000摩尔L¹中国上海化学试剂公司)是刚做好的日报和稀释。一个股票解决KMnO₄(0.2摩尔L¹中国北京化学试剂公司)准备每天1.0摩尔L¹H₂所以₄(中国,北京化学试剂公司)的解决方案。氢氧化钠、乙酸乙酯、盐酸和HNO₃得到从北京化学试剂公司(北京)或从天津化学试剂公司(天津)。所有试剂都是分析纯,除非另有说明在双重蒸馏水和准备。

设备和程序

流动注射化学发光与IFFL-D进行流动注射化学发光分析系统(西安Ruike电子设备公司,西安,中国)。FI-CL分析仪的原理图所示图1。试剂的解决方案是由蠕动泵(P,工作以恒定流量:30 rpm)通过三个流程线。的混合KMnO₄和H₂所以₄(1)和Na₂所以₃解决方案通过一个三通接头(2)涨跌互现,然后在流反应细胞(C)的样品溶液注入载流使用一个八路喷射阀配备100μl示例循环。增强的CL信号立即生产并记录。流动单元是一个10厘米长螺旋玻璃管(2.0毫米证件)和喷射阀和流动单元之间的距离大约是20厘米。荧光和吸收光谱监测使用f - 7000荧光光谱仪(日立、东京、日本)。荧光光谱仪也适应CL光谱的测量。

样品的预处理

三个收集尿液样本的麻醉学,河北医科大学第三医院。2.0毫升的样品调整pH值10 to11 2摩尔L¹氢氧化钠。在4000转离心10分钟去除沉淀,然后提取2毫升的乙酸乙酯。有机层是蒸发干燥的氮气流。干提取物溶解在FL-CL分析2毫升的水。

结果与讨论

动力学特性的化学发光反应

FL-CL分析进行之前,CL提出CL KMnO反应的动力学特性₄na₂所以₃kt被使用一个静态的系统研究。图2表明CL intensity-time概要文件。发现现在的反应速率非常快,只需要0.5秒被从试剂混合到最大的新兴市场。仅用了3 - 4达到最大峰值下降到基线水平。它还表明,CL强度大幅增加,在100年的天然气凝析液¹KT是图2 (b)显示。

为了研究化学发光增强的反应机理,(a) KMnO的荧光光谱₄na₂所以₃;(b) KMnO₄na₂所以₃kt分别使用荧光光谱检测,(显示图3)。CL KMnO强度₄na₂所以₃kt系统显著增加,但两个光谱显示出相似的范围和概要文件。建议这些共享一个共同的化学发光反应发光物种,二氧化硫*物种(16,17]。没有新的发射器产生的反应,KT的作用仅仅是作为增强剂。因此,这是表明,KT没有改变氯反应的机制。

因此,化学发光反应过程假设如下:

CL条件的优化

流量对CL强度的影响:流量是一个重要的因素影响不仅分析效率,而且系统的灵敏度。为了达到满意的排放强度,流量的影响在CL反应是检查的范围10 - 50 rpm。发现最大的CL信号得到的流量30 rpm。太低或高流速导致减少甚至没有CL流中的细胞,因此在我们的测量工作。

酸性介质的选择:的类型和浓度的酸反应体系影响化学发光排放强度。因此,四个不同的酸包括盐酸、HNO₃,和H₂所以₄不同浓度范围的0.2 - -1.5摩尔L¹分别进行了测试。结果显示最好的信号得到H₂所以₄媒介,最高的化学发光强度时产生氢的浓度₂所以₄was1.0摩尔L¹。因此,1.0摩尔L¹H₂所以₄被选作进一步研究。

钠的浓度的影响₂所以₃CL强度:不同浓度的钠的影响₂所以₃解决方案测试分析响应对应KT溶液浓度为50.0 L ng¹在范围2.0×10 - 3 - 1.0×10²摩尔L¹。它表明,相对CL强度增加Na₂所以₃浓度增加从2.0×10³7.0×10³摩尔L¹。当钠的浓度₂所以₃> 7.0×10³摩尔L¹,相对CL强度降低了。考虑到系统的灵敏度,7.0×10³摩尔L¹Na₂所以₃被选为最佳的顺向实验。

KMnO效果₄浓度在CL强度:KMnO4是重要的氧化剂测定KT的CL系统。因此,不同浓度的KMnO的影响₄1.0×10之间³和2.0×10³摩尔L⁻¹是检查。结果表明,信号和噪声的比值(S / N) KMnO的日益增加₄浓度。当KMnO的浓度₄超过1.6×10吗³摩尔L⁻¹,S / N逐渐减少。因此,1.6×10³摩尔L¹被选为最佳浓度KMnO吗₄为进一步研究。

校准和检测

为了获得KT的校准曲线,一系列的标准解决方案(n = 8) KT被添加到KMnO₄na₂所以₃系统在优化的实验条件下:[KMnO₄)= 1.6×10³,(Na₂所以₃)= 7.0×10³摩尔⁻¹,(H₂所以₄)= 1.0摩尔L⁻¹。录音输出CL提出系统的测量KT的记录,和实验结果表明,在最优条件下上面所提到的,CL的反应强度与浓度线性范围的KT 5.0 ng -600毫升⁻¹。线性回归方程是强度= 12.8 + 16.3摄氏度(c: ng毫升⁻¹,r = 0.9987)。的检出限(3σ)的回归方程是1.3 ng毫升⁻¹和相对标准偏差(R.S.D.3.2%,n = 11) 50.0 ng毫升⁻¹KT次方。

干扰的研究

为了评估拟议的CL的可能的分析应用系统样本,一些常见的无机离子的影响和一些相关的有机化合物在CL强度进行了测量50.0 ng毫升⁻¹KT次方。结果表1显示一个相当满意的选择性的方法。

表1:响应各种潜在的干扰。

应用程序

三个真正的尿液样本从KT注射获得志愿者收集注射后4 h和KT的数量是由上述FL-CL方法决定的。五个复制为每个时间点分析。评价该方法的有效性,添加标准的复苏实验一直做在同一时间。KT的化验的结果中给出表2。可以看出,恢复被发现96.6,98.2和95.4%,RSD分别为3.4,4.2,和3.5,分别。

表2:测定结果KT的尿液。

结论

摘要FL-CL KT测定检测方法的开发。方法有很好的敏感性,精度和更宽的线性范围,允许应用程序在KT测定尿和生物样品的分析。

确认

我们承认金融部门的支持健康河北(20180117)和河北的基础科学和技术委员会(1727728 d)。

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