研究

数量:15 (6)DOI: 10.37532 / tsbt.2019.15 .198 (6)

定性分析的杜鹃arboreum使用HPLC-ESI-QTOF-MS树叶提取物

夏尔马^*和Janardan Lamichhane^*

生物技术学系尼泊尔加德满都大学科学学院

*通信:: 夏尔马
生物技术学系尼泊尔加德满都大学科学学院
电子邮件: (电子邮件保护)
Janardan Lamichhane
生物技术学系尼泊尔加德满都大学科学学院
电子邮件: (电子邮件保护)

收到:2019年12月16日;接受:2019年12月27日;发表:2019年12月31日

引用:Sharma D, Lamichhane j .使用HPLC-ESI-QTOF-MS杜鹃arboreum叶提取物的定性分析。Biotechnol印第安纳j . 2019; 15 (6): 198。

文摘

尼泊尔最富有的草药来源药用植物和高的植物生物多样性即使在every100计的高度的变化。基于高生物多样性报告细胞介导的国花,尼泊尔,杜鹃arboreum(史密斯),收集从尼泊尔Palpa地区海拔1350从其甲醇提取物和植物化学的分析。基本的植物化学成分分析显示生物碱的存在,类黄酮香豆素类、皂甙。根据主要研究产出和样本基本化合物的重要性进一步再分析HPLC-ESI和QTOF-MS。13个不同化学重要的化合物r . arboreum被HPLC-ESI-QTOF-MS确认。其中,Rhodolatouside A和B Rhodolatouside首次报告为新的化合物在杜鹃arboreum从尼泊尔而香豆酸、没食子酸,Rhodolatouside, Leuco-pelargonidin, Rhodolatouside B,杨梅酮,Hyperoside,槲皮素,Maslinic酸,亚油酸,1-Naphthalenepropanol,硬脂酸和桦木酸/乌索酸观察之前报道的化合物。所有的化合物都认同他们的分子式。

关键字

HPLC-ESI-QTOF-MS;Rhodolatouside;Rhodolatouside B;槲皮素;1-Naphthalenepropanol;环烯醚萜苷

介绍

的茎或根r . arboreum有时用于阿育吠陀医学对一些疾病和其他一些情况下引用但他们非常罕见和难以核实1]。植物温和酸味花,偶尔用作泡菜(尼泊尔“罪”)由当地居民(2]。花有甜的,酸的味道是用于制造好的子酸果冻。他们,在喜马拉雅的部分地区,据Madden和瓦被当地人喝醉了的大量的消费。根据吉尔Ronsley,从印度喜马偕尔邦,当地人做泡菜(印地语“酸辣酱”)和南瓜用苏打水和水混合作为冷饮。杜鹃arboreum被介绍给英国从印度公元1811年(3]。

的科学研究杜鹃花在这个世界的一部分开始只有十八世纪末期随着建立植物园在加尔各答,印度在1972年由英国政权。1850年,约瑟夫·胡克爵士45新引入的物种的杜鹃(4]。20世纪初,大约300新物种的杜鹃是已知的植物学家(3),到现在超过1200人物种杜鹃花是已知的。人们已经发现,r . arboreum叶子显示毒性,即使它的花瓣被用来使南瓜(5),除此之外它显示抗炎和antinociceptive活动(6]。类黄酮、槲皮素分离乙酸乙酯部分的甲醇提取的花瓣r . arboreum通过重复交联葡聚糖LH-20列色谱法技术(7,8]。抗真菌的活动也与生物活性成分的树皮中发现的报道r . arboreum(9,10]。抗氧化活性(11)和一氧化氮合酶激活属性也在花12)这可能被利用作为一个有前途的治疗。酒精提取的叶子r . arboreum被发现具有显著减少体液和细胞免疫反应13,14]。

在这个研究的植物样本r . arboreum史密斯。(杜鹃花科)是来自尼泊尔Palpa地区在海拔1350米的2017年3月。植物学家发现的植物样本和存入加德满都大学植物标本。

材料和方法

样本收集和样品制备

提取r . arboreum被用作示例从尼泊尔巴布亚Tansen收集。冷提取进行了使用甲醇作为溶剂。原油提取测试使用生根的植物化学成分分析协议生物碱、酚类化合物(4皂甙、苷、丹宁酸、黄酮类和香豆素类(11]匹配导致提取(由以前的研究表1)。

属性	香豆素类	皂苷	配糖体	生物碱	固醇	还原糖	类黄酮
样本
Palpa1	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +
Palpa2	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +
Palpa3	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +
Palpa4	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +
Palpa5	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +	+ +

表1。植物化学的筛选r . arboreum。

几个样品高微生物和进一步分析了高效液相色谱检测抗菌活性ESI-QTOF-MS确定活性化合物存在于样品。HPLC-ESI-QTOF-MS分析上执行一个安捷伦6520四极飞行时间质谱仪(QTOF)与安捷伦1200 -高效液相色谱系统通过双电喷雾电离(ESI)接口(美国安捷伦科技)。安捷伦1200 -高效液相色谱系统由一个四元泵(G1311A),一个在线真空脱气装置(G1322A) autosampler (G1329A),和一个二极管阵列检测器(G1315D)。进行高效液相色谱分离一个水域XBridge C18柱(50毫米×4.6毫米,3.5μ)。0.1%的流动相由甲酸水溶液(A)和乙腈(B)流量为0.4毫升/分钟的梯度程序下10%到80% (B)最初的20分钟,然后90% (B)从20分钟到25分钟,维持在90% (B)从25分钟到30分钟,最后回到初始条件90%到10% (B)从30到40分钟。进样体积是10μL。

二极管阵列检测器记录紫外光谱在400 nm和190 nm范围设置监控在254纳米和280纳米。质量光谱分析是安捷伦6520 QTOF质谱仪进行积极的应急服务国际公司模式。QTOF分析仪的分辨能力是高于10000(应用、半宽度)和光谱获得的质量范围内m / z 100 - 1500。氮是用作喷洒,干燥气体和碰撞。毛细管温度设置为350°C和喷雾器42 psi的压力和干燥气体流量是12 L / min。离子源参数如Vcap片段,回收船,和八极射频(rf)峰值电压是3500 V, 150 V, 65 V和750 V,分别为(13]。

结果与讨论

色谱峰的结果

这两个新成分环烯醚萜苷,Rhodolatouside Rhodolatouside B,分子质量的[M + H]⁺375.1289和377.1448 (图1)观察质量缺陷分别为0.8和1.6,包括之前报道中发现的化合物r . arboreum史密斯HPLC-ESI-QTOF-MS方法。Rhodolatouside的分子式和Rhodolatouside B被发现C₁₆H₂₂O₁₀和C₁₆H₂₄O₁₀分别为(表2)。连同这两个化合物之前报道的化合物杨梅酮[M + H]⁺319.0449 (C₁₅H₁₀O₈),Hyperoside [M + H]⁺465.1028 (C₂₁H_20.O₁₂)、槲皮素[M + H]⁺303.0504 (C₁₅H₁₀O₇),Maslinic酸[M + H]⁺473.3607 (C_30.H₄₈O₄),亚油酸(M + H)⁺281.2476 (C₁₈H₃₂O₂),香豆酸[M + H]⁺165.0538 (C₉H₈O₃)、没食子酸[M + H) + 171.0295 (C₇H₆O₅),Leuco-pelargonidin [M + H]⁺291.0672 (C₁₅H₁₄O₆),1-Nephthalenepropanol [M + H]⁺187.1127 (C₁₃H₁₄O),硬脂酸[M + H]⁺283.2634 (C₁₈H₃₄O₂)和桦木酸/乌索酸[M + H]⁺457.3677 (C_30.H₄₈O₃)也被观察到与各自的质量高峰和分子式(图2和表2与他们的质量缺陷()图3)。从HPLC-ESI-QTOF-MS报道数据支持组件推定地暗示(植物化学的屏幕11为每个样本)报道r . arboreum从不同的位置获得Palpa区尼泊尔。质量峰观察到在小分子检测的顺序首先其次是较大的分子在不同采集时间(红色箭头线)指示不同的飞行时间质量分子光谱学女士。的橙色线表示作为一个计算已知化合物的质量增加订单恰逢其观察到的质量与蓝线(图4)。的文献调查结果报告化合物从这个研究显示有强有力的草药药物资源(15]。这强调了植物在顺势疗法结合的重要性医疗保健产品。

图1所示。女士光谱Rhodolatouside HPLC-ESI-QTOF-MS Rhodolatouside B。

图2。其他确定化合物的光谱女士HPLC-ESI-QTOF-MS:这些化合物已经被先前的研究人员报道。

图3。比较Ret.时间和错误在QTOF-MS质量(质量缺陷)。

图4。高峰分化对保留时间,计算质量和观察到的质量。

没有达到顶峰。	延迟的时间(分钟)	卡尔。[M + H) +质量	奥林匹克广播服务公司。质量(M + H) +	错误(∆ppm)	分子式	识别
1。	0.66	165.055	165.054	-4.8	C₉H₈O₃	香豆酸
2。	0.87	- - - - - -	381.081		- - - - - -	NA *
3所示。	0.89	171.029	171.03	1。2	C₇H₆O₅	没食子酸
4所示。	1.07	375.129	375.129	0.8	C₁₆H₂₂O₁₀	Rhodolatouside一
5。	1.21	291.086	291.087	3.1	C₁₅H₁₄O₆	Leuco-pelargonidin
6。	1.31	377.144	377.145	1。6	C₁₆H₂₄O₁₀	Rhodolatouside B
7所示。	1.68	319.045	319.045	0.3	C₁₅H₁₀O₈	杨梅酮
8。	5.67	465.103	465.103	0.2	C₂₁H_20.O₁₂	Hyperoside
9。	6.73	- - - - - -	303.051		- - - - - -	NA *
10。	7.21	- - - - - -	435.094		- - - - - -	NA *
11。	7.78	- - - - - -	303.051		- - - - - -	NA *
12。	7.83	303.051	303.05	-0.3	C₁₅H₁₀O₇	槲皮素
13。	9.42	- - - - - -	285.06		- - - - - -	NA *
14。	10.9	- - - - - -	671.164		- - - - - -	NA *
15。	11.1	- - - - - -	303.051		- - - - - -	NA *
16。	12.1	- - - - - -	264.232		- - - - - -	NA *
17所示。	13.7	- - - - - -	307.154		- - - - - -	NA *
18岁。	14.4	- - - - - -	345.06	- - - - - -	- - - - - -	NA *
19所示。	14.7	- - - - - -	307.153	- - - - - -	- - - - - -	NA *
20.	15	- - - - - -	221.19	- - - - - -	- - - - - -	NA *
21。	15	329.156	339.156
22。	15.5	- - - - - -	225.196	- - - - - -	- - - - - -	NA *
23。	15.7	- - - - - -	467.316	- - - - - -	- - - - - -	NA *
24。	16.9	- - - - - -	451.323	- - - - - -	- - - - - -	NA *
25。	17.6	- - - - - -	469.331	- - - - - -	- - - - - -	NA *
26岁。	17.8	- - - - - -	451.32	- - - - - -	- - - - - -	NA *
27。	18.9	- - - - - -	453.338	- - - - - -	- - - - - -	NA *
28。	20.9	- - - - - -	329.269	- - - - - -	- - - - - -	NA *
29。	22.9	- - - - - -	305.176	- - - - - -	- - - - - -	NA *
30.	23.3	- - - - - -	203.18	- - - - - -	- - - - - -	NA *
31日。	23.4	473.363	473.361	-3.8	C_30.H₄₈O₄	Maslinic酸
32。	23.5	- - - - - -	203.18		- - - - - -	NA *
33。	23.8	- - - - - -	203.179		- - - - - -	NA *
34。	24.2	- - - - - -	205.195		- - - - - -	NA *
35。	24.3	281.248	281.248	0.4	C₁₈H₃₂O₂	亚油酸
36。	24.6	- - - - - -	455.352		- - - - - -	NA *
37岁。	25	187.112	187.113	5.3	C₁₃H₁₄O	1-Naphthalenepropanol
38。	25.6	- - - - - -	205.195		- - - - - -	NA *
39岁。	26.1	- - - - - -	203.18		- - - - - -	NA *
40。	28.6	283.263	283.263	0.7	C₁₈H₃₄O₂	硬脂酸
41岁。	30.4	- - - - - -	437.34		- - - - - -	NA *
42。	33.1	- - - - - -	439.357	- - - - - -	- - - - - -	NA *
43。	33.3	457.368	457.368	0.2	C_30.H₄₈O₃	桦木酸/乌索酸

* NA:不分配

表2。,8经峰识别的示例使用HPLC-ESI-QTOF-MS分析。

这些结果应该进一步验证了更严格的科学研究和结构的立体化学次生代谢物可能其重要性定义为未来的药物。进一步基于DNA的身份验证和保护其身份和indigenousness所需。

批准其效用高,工厂可以是一个良好的经济来源为穷人的人可以驯化植物大规模医疗附加值和市场这是一个工厂,这将有助于金融提升社区的(16,17]。

确认

大学拨款委员会支持的工作是财务尼泊尔和尼泊尔NAST发表支持,HPLC-ESI-QTOF-MS分析是在中央做药物研究所勒克瑙。我们感谢Tirtha Maiya Shrestha分类识别的样本。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

1。作者:教授Janardan Lamichhane

工作贡献:作为主管提供完整的指导执行研究活动包括所有所需的设施在实验室研究。

2。作者:夏尔马

工作贡献:作为一名学生在实验室研究工作活动在实验室作为全职研究包括样本采集、植物化学的分析,研究执行。

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