研究
，卷:15(3)DOI: 10.37532/0974-7435.2019.15(3).189唾液蛋白质组学在口腔癌早期诊断中的应用综述
- *通信:
-
Anitha R Sagarkar
牙科科学学院中心实验室
Ramaiah大学，班加罗尔，卡纳塔克邦，印度
电子邮件: (电子邮件保护)
收到:2019年4月3日;接受:2019年5月3日;发表:2019年5月7日
引用:张志强，王志强，王志强，等。唾蛋白质组学口腔癌早期诊断综述。生物技术工业。
2019; 15(3): 189。
摘要
口服癌症是主要的健康在印度，吸烟是影响大量人口的主要可预防病因之一。早期诊断是减轻疾病负担的重要因素，分子无创(唾液为基础)诊断被认为是近年来的发展趋势。唾液从个体的单个或多个腺体收集，通常是刺激型或非刺激型。唾液样本准备和分割，以确定蛋白质组序列使用任何先进的技术。
关键字
口腔癌症;唾液蛋白质组学;早期诊断
简介
口腔鳞状细胞癌(OSCC)在印度的发病率很高，每10万人中有20人，5年生存率(35%)，因此有资格成为一个主要的公众健康这不仅是印度的问题，也是全球的问题。1，2］．OSCC是由烟草诱导的多步骤过程，由一系列相互依赖的遗传、蛋白质和生化改变而不是单一的决定性事件引起[3.］．所有这些分子反应都是可以被识别为生物标志物的标志，用于各种目的。蛋白质组学时代也被称为后基因组学时代，因为它们相互作用的关系由于生物对体内不同反应的反应[4］．与基于血液的采集相比，基于唾液的采集具有一些临床优势，如无创、易于操作和制备、易于运输、具有成本效益、安全有效、不需要经过高度训练的人员，可以轻松、容易地进行，不需要昂贵的工具[5］．
唾液蛋白质组学
的唾液蛋白质组学表示普通和口服蛋白质的综合光谱健康［6］．这些蛋白质是由于细胞变化而产生的，这些变化以异构体和翻译后形式存在于细胞本身或在唾液中作为比较低的水平。确定的蛋白质水平通常完全或部分表达，通常依赖于网络结合成分[7］．的蛋白质含量唾液一般由对侧的大唾液腺(腮腺、下颌下腺和舌下腺)和小唾液腺组成。[8］．
为了进一步研究蛋白质组学，定量和定性都可以揭示发病率或死亡率组合，这是非常有效的早期诊断或进展或监测范式医学实践(9］．唾液蛋白从0.5 mg/ml到3.0 mg/ml不等，至少有300个人类起源的序列[10］．
唾蛋白质组学要求精心设计的唾液样本收集/预处理协议［11］．常用的剖析方法有二维凝胶电泳或液相色谱，然后进行胰蛋白酶消化，LC-MS/MS和数据库搜索，以确定所选的感兴趣的蛋白质靶点[12］．或者其他的蛋白质组学方法可用于定量蛋白质水平以进行验证[13］．
用于蛋白质组学评估的唾液样本采集和存储动力学可分为以下几个因素
收集唾液的方法可能包括引流、吐痰、抽吸或拭子，没有任何通用的方法协议本身[5］．唾液蛋白质组水平既反映生理状况，也反映病理变化[8］．用于收集未刺激唾液的口腔液体收集装置包括Orasure艾滋病毒1、Uplink, Salivette, Toothette plus, BBL培养棉签，transorb芯，口腔扩散水槽及超滤液唾液收集器[14］．
影响唾液收集的生理因素:这包括流量，昼夜节律，是全唾液还是特定的唾液，刺激或未刺激，先前使用的刺激类型-如果刺激唾液，避免吃，喝，吸烟或使用口腔卫生产品(8]、生理状况或状态及所涉及的采集方法[5］．这些程序一直有效健康和患病的人。从口腔收集唾液癌症病人必须活组织检查确认并遵守标准协议［15］．
危险因素:所有患者在手术前必须签署强制性知情同意书[15］．从健康的人身上收集唾液，不超过一小时的任何口腔活动，如食物摄入。一些研究还表明刷牙或咀嚼石蜡，以促进唾液的产生。虽然收集唾液的时间应在中午12点以内，但建议在上午9点至10点收集唾液[8］．唾液收集到冰盘或小运输箱中。Lashley杯可用于收集特定腺体的唾液[5］．收集到的唾液必须立即离心，然后冷冻[14］．
临床医生/研究人员相关因素:唾蛋白质组学分析基于三个主要原则:
A.蛋白质分离
B.蛋白质/多肽的比较表达分析
C.蛋白质/多肽的鉴定
在唾液采集过程中，让患者了解研究视角、采集前说明和礼仪是非常重要的。唾液蛋白质的生化不稳定性要求立即分析，由于其易腐烂的性质。
须遵守贮存准则[14]：
•如果在1小时内完成分析，唾液可以在室温下储存
•如果分析计划长达6小时，唾液可以储存在4°C
“如果分析从几天推迟到几个月，建议唾液储存在-20°C或-80°C更好。
样品必须用离心机去除大分子解冻至室温后，在14,000至15,000转/分时[16) (表1）.
| 不同的唾液收集方法 | |
|---|---|
| 收集唾液的类型 | 收集装置的方法和类型 |
| 全唾液(WS) | 患者在收集唾液前至少1小时应避免进食、饮水和任何口腔卫生/牙科治疗程序(最佳收集时间为上午8点至上午10点)，在收集唾液前，用蒸馏水冲洗口腔1分钟，5分钟后收集5ml唾液，收集的样本必须在1小时内在实验室处理 |
| 未受刺激全唾液(USWS [7］ | 被动流口水:这种方法限制口腔运动，将唾液从下唇排到一个塑料瓶中。 |
| 随地吐痰的方法: | |
| 进行彻底的临床检查 | |
| 受试者被要求在采集样本前用蒸馏水漱口 | |
| 然后要求志愿者产生唾液，并将唾液吐到一个宽口无菌样本收集瓶中，持续5分钟至10分钟，通常从每个受试者身上收集2毫升至5毫升 | |
| 收集容器应立即放入冰桶中。然后将样品转移到Eppendorf管中，以5000转/分的速度离心两次，持续10分钟，以去除任何样品大分子并去角质细胞唾液样本。 | |
| 将唾液上清液分成3至5等份，在-80°C下进一步储存以进行短期储存 | |
| 与流口水法相比，这种方法的缺点是细菌含量高出14倍，因此不太推荐[17］ | |
| 受刺激全唾液[16］ | 为了刺激腺体，咀嚼不同的东西，如天然口香糖、一块石蜡、柠檬酸和粉末饮料晶体。刺激唾液常在石蜡咀嚼或酸味刺激后获得。 |
| 腮腺 | a)对于腮腺唾液，可根据Lashley [18Carlson和Crittenden介绍的方法。在这种方法中，使用了带有两个出口管的双腔金属杯。一端用真空吸力固定杯子。下半部分是唾液的收集器。可通过涂抹柠檬酸(10%;1毫升)每30秒滴于舌背。在样本采集前，先丢弃前1.5毫升唾液。 |
| 下颌下腺[16］ | 对于下颌下唾液，在阻塞腮腺和舌下导管后，将收集装置的尖端放置在沃顿管口处收集唾液 |
| 小腺体[16］ | Kutscher使用毛细管从小腺体唾液口腔拭子(SOS)中收集唾液[20.］．位于下唇外翻表面的小腺体。 |
表1。不同的唾液收集方法。
材料与方法
蛋白质的提取和纯化方法
样品被解冻到40°C，然后离心去除大分子包括细胞碎片。在上清液中加入丙酮中的TCA，使蛋白质在-20°C下沉淀一夜[16］．
蛋白质提取方法[19]：
1.电泳
2.高效液相色谱法
1.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)
2.非变性条件下的PAGE
3.等电点聚焦
4.二维电泳(2 de)
5.毛细电泳(CE)和
6.自由流动电泳是否都用于唾液研究，目的不同
根据Doustjalali等人。[20.]，样品分馏是使用PROTEAN IEF系统(Bio-Rad Laboratories, USA)进行的一维等电聚焦(IEF)。采用2-DE体系(Bio-Rad Laboratories, USA)，在12.5% SDS板凝胶上进行二次分离，IPG条用0.5%琼脂糖密封在凝胶顶部。SDS-PAGE在50V下运行40 mA/凝胶30分钟。
蛋白质组学技术，如:
1.二维电泳(2 de)
2.2 d-liquid色谱/质量光谱法(2 d-lc / MS)
3.基质辅助激光解吸电离飞行质量时间光谱法(MALDI-TOF / MS) (16),
4.表面增强激光解吸/电离飞行时间质量光谱法(SELDI-TOF/MS)，已用于唾液研究[8］
常见的识别蛋白可以被列出如下(表2和表3)：
| SL。不。 | 唾液蛋白质 | 描述 | 方法 | 数量 | 浓度 | 假定值 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 总计唾液酸 | 蛋白结合的monosaccharide-glycoprotein | Skoza和Mohos，茚三酮法 | -40例(OSCC) | 102.12±15.38 | 0 |
| Controls-20 | 40.941±5.772 | |||||
| 2 | 总蛋白 | 防御素-1和施他素 | 双缩脲法，劳瑞法 | Cases-40 | 1.68±0.19 | 0.322 |
| Controls-20 | 1.63±0.15 | |||||
| 3. | 总糖 | Glycoconjugates | 苯酚-硫酸 | Cases-40 | 2.497±0.55 | 0.311 |
| 控制20 | 2.63±0.3339 | |||||
| 4 | MMP1 | 矩阵metalloprotease | lc -多反应监测技术 | 控制- 76 | 0.9 ng / ml | < 0.001 |
| 例- 113 | 76.7 ng / ml | |||||
| 5 | MMP3 | 矩阵metalloprotease | lc -多反应监测技术 | 控制- 170 | 3.6 ng / ml | < 0.001 |
| 例- 125 | 15.9 ng / ml | |||||
| 6 | MMP 9 | 金属蛋白酶参与癌症发病机理因为它们会降解IV型胶原蛋白。 | lc -多反应监测技术 | 控制- 180 | 28.9 ng / ml | < 0.001 |
| 例- 138 | 93.8 ng / ml | |||||
| 7 | KNG1 | (激肽原1) | lc -多反应监测技术 | 控制- 197 | 107.3 ng / ml | < 0.001 |
| 例- 131 | 586.3 ng / ml | |||||
| 8 | ANXA2 | (膜联蛋白A2) | lc -多反应监测技术 | 控制- 187 | 12.4 ng / ml | < 0.001 |
| 例- 131 | 63.7 ng / ml | |||||
| 9 | 可溶性CD44 | 以可溶性形式释放的粘附分子蛋白酶 | 夹心型ELISA试剂盒 | 控制- 84 | 9.31 (14.85) | < 0.001 |
| 例- 102 | 24.44 (32.01) |
表2。简要总结不同的唾液蛋白质组学在不同的研究中估计。
| SL。 | 唾液蛋白质 | 描述 | 检测方法 |
|---|---|---|---|
| 1. | M2BP (Mac 2结合蛋白) | 鼻咽癌中肿瘤抗原明显无调控。 | 减去蛋白质组学是指使用多维LC分离和依赖数据的MS/MS分析，直接分析来自两种细胞或病理状态的样品中表达的蛋白质。 |
| 2. | MRP14骨髓相关蛋白142 | 组织细胞口腔舌头癌症 | |
| 3. | CD 59 | 过分表达的赞美限制因素肿瘤细胞它们使肿瘤细胞避免恭维依赖和抗体介导的杀戮。 | |
| 4. | 分析 | 微丝系统的调节器，通过与细胞质和核配体的相互作用参与各种信号通路 | |
| 5. | 过氧化氢酶 | 保护细胞免受氧化压力过氧化氢酶水平的改变在许多人类肿瘤中是明显的并且从根本上参与了癌变和肿瘤进展。 |
表3。唾液蛋白质组学检测方法。
结论
唾蛋白质组学是早期诊断口腔癌症因为它们有很高的临床潜力。然而，这些生物标志物的鉴定需要在更大的人群中进一步验证。这些生物标记物作为生物变异的结果，不仅强调了早期的生理状况，而且强调了病理状况，从而可以预防。这确实很划算。
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