原文
，卷:16(14)
硫酸铈铵和甲基橙间接分光光度法测定阿托伐他汀制剂含量
收到:2016年6月7日;接受:2016年7月4日;发表:2016年7月8日
引用:杨晓明，陈晓明，陈晓明，等。硫酸铈铵和甲基橙间接分光光度法测定阿托伐他汀制剂中阿托伐他汀含量。化工学报，2016;16(14):105。
摘要
建立了一种简便、灵敏、可靠的测定阿托伐他汀制剂中阿托伐他汀含量的分光光度法。该方法依赖于阿托伐他汀与硫酸铈铵(ACS)在酸性介质中的氧化还原反应。让剩余的未反应的ACS与甲基橙(MO)反应，然后测量剩余的未漂白的MO。许多控制这一反应的参数已经被研究和优化。该方法在3 μg/ml ~ 23 μg/ml范围内按照ICH标准进行验证。检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.83 μg/ml和2.57 μg/ml。将该方法与文献报道的方法进行比较，发现两种方法之间无显著性差异，成功应用于阿托伐他汀片剂中阿托伐他汀含量的定量测定。
关键字
阿托伐他汀;硫酸铈铵;分光光度法;甲基橙;氧化还原反应;LOD;定量限
简介
阿特伐他汀(ASN)为(3R,5R)-7-[2-(4-氟苯基)-3-苯基-4-(苯氨甲酰)-5-(丙烷-2-基)- 1h -吡咯-1-基]-3,5-二羟基庚酸(CAS编号:134523-03-8)(图1)．它是一种通过抑制HMG-CoA(3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶)还原酶来降低胆固醇水平的降血脂药物[1］．这种酶在胆固醇合成中的作用是由于它催化HMG-CoA转化为甲羟戊酸[2］．降低胆固醇生物合成会通过增加LDL受体来清除血液中的低密度脂蛋白。
图1所示。(a)未反应的硫酸铈铵(20 μg/ml阿托伐他汀)与剩余MO反应后的吸收光谱，(b)硫酸铈铵在酸性介质中的吸收光谱，(c)阿托伐他汀(20 μg/ml)在酸性介质中的吸收光谱。
它通过抑制HMG-CoA还原酶来阻止胆固醇的合成，这将阻止胆固醇的产生。长期口服ASN可显著降低总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和血浆甘油三酯。已经发表了许多方法来分析ASN的不同分析技术，分光光度法[3.-6]，荧光分光光度法[7]，高性能液体色谱法［8，9]， lc-ms [10-12］．大多数已发表的方法使用了复杂的仪器和(或)程序。由于ASN在心脏病治疗中的重要性以及它在许多药物剂型中的存在，有必要开发一种简单、敏感和可靠的方法。该方法仪器简单，程序简单，可用于ASN的常规测定。
实验
装置
Jasco V-630 UV-VIS分光光度计与Spectra Manager™II软件。
化学品和试剂
整个过程使用去离子水(PureLab Flex)。甲基橙(MO)购自印度马哈拉施特拉邦孟买的SD精细化工有限公司(SDFCL)。二水硫酸铈铵(ACS)购自德国施泰因海姆Sigma-Aldrich公司。硫酸98%购自埃及El-NASR公司。
制药配方
EIPICO生产的标示含有10 mg阿托伐他汀的ATOR 10片从当地市场购买。
工作溶液的制备
将阿托伐他汀溶于甲醇，直接制备阿托伐他汀工作标准溶液，浓度为1 mg/ml， -20℃保存。将MO溶于水，直接制备MO工作溶液，得到0.001 M水溶液，4℃保存。将适当体积的98%硫酸溶于水中，制得0.5 M和5 M硫酸。将硫酸铈铵直接溶解在0.5 M的硫酸中，得到0.001 M的水溶液，并保存于4℃。
制定校准标准
将0.030 ml至0.230 ml的阿托伐他汀工作溶液转移到一系列10 ml容量烧瓶中，然后加入0.5 ml的5 M硫酸。加入1.3 ml的ACS工作溶液，偶尔摇晃5分钟。然后加入0.3 ml的MO工作溶液，偶尔摇晃5分钟，然后用水将体积完成，以得到含有阿托伐他汀的校准标准物，其范围为3 μg/ml至23 μg/ml。
药物制剂的制备
将10片压碎，粉状，均质，用50 ml甲醇提取，用干漏斗和滤纸过滤。滤液经0.2 um Millipore过滤器过滤，转移到100ml容量瓶中，用甲醇填满体积，4℃保存。取0.07 ml，得到7 μg/ml的药物溶液。
一般程序
将0.2 ml阿托伐他汀工作溶液转移到10 ml容量瓶中，然后加入4 ml去离子水和1 ml 5 M硫酸。加入2毫升硫酸铈铵工作溶液，然后在室温下偶尔摇晃15分钟。然后加入0.5 ml的MO工作溶液，在室温下偶尔摇晃10分钟，然后用水完成体积到标记。该溶液在紫外可见分光光度计中扫描试剂空白。
结果与讨论
反应机理解释
MO在波长508 nm处吸收最大。ACS是酸性介质中的强氧化剂。它能被氧化MO漂白。ASN与ACS之间的反应属于氧化还原反应。在已知过量氧化的ASN和扩孔未反应的ACS中加入酸化的ACS会漂白MO的颜色，高浓度的ASN会消耗更多的ACS，增加MO的残留量。结论:在508 nm波长，ASN的浓度与MO的吸收强度呈线性关系。图1得到了ASN的光谱特征，以及508 nm波长的特征和MO。
首先，研究了ACS对阿托伐他汀的氧化作用，发现含有该药物的溶液在λ 508 nm处对MO具有吸光度，与仅含有ASC和MO的空白相比(图1)．
在室温下研究了影响这种间接测定的不同因素，以确定测定程序的最佳条件。其中包括甲基橙的最佳用量、ACS的最佳用量、酸的用量、阿托伐他汀氧化时间、MO漂白时间和颜色稳定性。
结果表明，在λ 508 nm处，当MO为0.3 ml, ACS为1.3 ml，硫酸为0.5 ml时，MO的最大吸光度为A。反应时间不超过5 min，色稳定性可达1 h。在优化的实验条件下，根据ICH指南验证了该方法的线性度、检测和定量限、准确度和精密度[乐动KENO快乐彩13］．根据所得到的校准峰值，将吸光度值与相应的浓度(μg/ml)绘制出来，并得到校准图(图1)．在3 μg/ml ~ 23 μg/ml范围内呈线性关系。决定系数(r2)为0.999。在整个校准范围内，校准图具有可靠的重现性。计算回归方程如下:
Y=0.04991 × X-0.09768 r=0.999
其中X为浓度(μg/ml)， Y为吸光度，r为回归系数(图1)．
根据回归线的残差标准差，计算出LOD和LOQ分别为0.83 μg/ml和2.57 μg/ml (表1）
| 线性范围 | 3µg/ml ~ 23µg/ml |
| 坡 | 0.048 |
| 拦截 | -0.079 |
| 相关系数 | 0.999 |
| r2 | 0.999 |
| 斜坡东南度 | 6.545 × 104 |
| 斜率置信极限 | 0.048±1.60 × 103 |
| 截距东南角 | 9.351 × 103 |
| 截距置信限 | -0.079±0.023 |
| 剩余SD (Sy / x） | 0.012 |
表1。间接分光光度法测定阿托伐他汀的线性关系。
该方法的准确度可接受(表2)．对提出的方法与官方方法的性能进行统计比较，学生t检验和方差比f检验的结果分别表明，两者在准确性和精密度上没有显著差异(表3)．日内和日间精密度试验表明，所提方法重复性较好，%RSD值较小(表4)．
| 所用浓度(µg/ml) | 复苏*百分比 | 平均数±标准差 | %相对标准偏差 | 交易所 | 方差 |
|---|---|---|---|---|---|
| 4 | 99.37% | 99.28±0.50 | 0.50% | 0.22% | ０．２５ |
| 7 | 99.61% | ||||
| 12 | 98.81% | ||||
| 16 | 98.74% | ||||
| 21 | 99.89% |
*三种不同测定值的平均值。
表2。间接分光光度法测定阿托伐他汀的准确度。
| 项 | 提出了 | 官方[14] |
|---|---|---|
| 平均精度±标准差 | 99.28±0.50 | 99.74±0.73 |
| %相对标准偏差 | 0.50% | 0.73% |
| %的比例 | 0.22% | 0.33% |
| N | 5 | 5 |
| 方差 | ０．２５ | 0.53 |
| t (2.31) | 1.15 | |
| 野生(6.39) | 2.11 |
括号中的值表示t和F在p=0.05时的表值。
表3。本方法与官方纯阿托伐他汀分析方法性能的统计比较。
| 盘中精度(%相对标准偏差) | 0.54% |
| Inter-day精度(%相对标准偏差) | 0.80% |
表4。间接分光光度法纯度分析阿托伐他汀的精密度测试结果。
将间接分光光度法应用于阿托伐他汀10 mg片剂中阿托伐他汀的含量测定，验证了间接分光光度法对阿托伐他汀制剂的质量控制检测的有效性。利用该方法得到的回归方程计算阿托伐他汀浓度。为了验证其在药品剂型上的应用，采用了标准添加技术。服用阿托伐他汀的平均回收率为97.11±0.45，添加阿托伐他汀的平均回收率为99.28±0.91 (表5)．
| 项 | 服用浓度(µg/ml) | 添加浓度(µg/ml) | 复苏*百分比 |
|---|---|---|---|
| 7 | 5 | 98.36% | |
| 7 | 98.71% | ||
| 9 | 100.54% | ||
| 11 | 99.22% | ||
| 13 | 100.24% | ||
| 15 | 98.62% | ||
| 平均值±SD | 97.11±0.45 | 99.28±0.91 | |
| %相对标准偏差 | 0.46% | 0.92% | |
| %的比例 | 0.27% | 0.37% | |
| 方差 | 0.20 | 0.83 |
表5所示。采用标准加入法间接分光光度法测定阿托伐他汀片的含量。
结论
以往的研究结果表明，采用ACS/MO氧化还原体系分光光度法测定ASN是有益的。该方法的主要优点是简单、灵敏、经济。所建立的方法可用于散粉中ASN的常规分析，也可用于质量控制实验室对所研究散粉进行常规分析药物在原材料中，在药物配方中。
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