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验证权力平等主义的/产物梯度同时估计扑热息痛布洛芬和咖啡因销售配方中使用双氯芬酸作为内标
- *通讯作者:
-
Dushyanth Reddy V药物化学、萨大学药学院,萨大学,590001年Belagavi,印度
电话:08312471399;电子邮件: (电子邮件保护)
收到:2016年10月16日接受:2017年1月16日发表:2017年1月22日
引用:先后PJ, Dushyanth Reddy V, Mannor VS, et al。验证权力平等主义的/产物梯度同时估计扑热息痛布洛芬和咖啡因销售配方中使用双氯芬酸作为内标。肛门化学印第安纳j . 2017; 17 (1): 116。
文摘
目的:开发一个验证产物的同时估计方法扑热息痛布洛芬和咖啡因。方法:使用高效液相色谱仪器是岛津制作所与反向阶段ODS-Hypersil-C18 LC-20AD(250毫米×4.6毫米,5μm)列使用乙腈:水(挺)作为流动相pH值调整到2.8。流率维持在0.3 ml / min和紫外检测是在203海里。
结果:线性的方法验证,精度,精度、专一性、鲁棒性和强度根据我的指导方针。乐动KENO快乐彩扑热息痛的保留时间,布洛芬和咖啡因被发现是9.7,12.66和10.48。回归分析显示良好的线性浓度范围的1.25μg /毫升为扑热息痛20μg /毫升,0.625μg /毫升10μg /布洛芬和0.625毫升μg /毫升10μg /毫升咖啡因。经济复苏的研究方法给好的结果在不到2%的RSD为99.89%至100.48%。
结论:该方法被发现适合销售的分析制定的其他辅料。
关键字
扑热息痛;高效液相色谱法;色谱法;布洛芬;抗炎
介绍
扑热息痛(对乙酰氨基酚)是化学N - (4-hydroxyphenyl)乙酰胺是晶体是很少可溶性化合物分类下的解热镇痛药。药物分类下这个类具有止痛和退热的活动但缺乏抗炎作用表示用于敏感的病人阿司匹林与往常一样成人剂量325毫克至650微克剂量大于2.6克/天不明智的长期治疗由于其肝毒性。退热的效果对乙酰氨基酚的抑制提供内源性白细胞的致热源释放细胞在外部刺激或激活与外源性致热源。对乙酰氨基酚具有镇痛的活动关节炎和肌肉骨骼疾病。
对乙酰氨基酚是可用在各种配方说栓剂,片剂、胶囊、颗粒和解决方案。布洛芬是化学2 - (4-isobutylphenyl)丙酸是晶体是很少可溶性化合物。它是属于非甾体抗炎药物是第一个非甾体抗炎药吲哚美辛后批准。第一个非甾体抗炎药成为场外(OTC)的药物。外消旋混合物甚至销售其生物反应欠几乎显然与S -(+)异构体。布洛芬比阿司匹林更有力但比吲哚美辛不那么有效。布洛芬生产中等水平的胃刺激(1]。布洛芬表示与类风湿性关节炎患者,骨关节炎、发烧和痛经。咖啡因是化学1,3 7-trimethyl-1H-purine-2 6 (3 h, 7小时)土卫四乙酰胺是晶体是很少可溶性化合物具有良好的化学甲基黄嘌呤自然发生在咖啡(阿拉比卡咖啡),通常称为兴奋剂和支气管扩张剂。咖啡因是通常添加到其他场外镇痛和兴奋剂。
方法
1。紫外分析API的
2。高效液相色谱方法开发
一个权力平等主义的。
b。梯度
3所示。选择的内部标准
4所示。API的分析方法量化
色谱法
紫外线光谱学(吸收光谱)是使用最广泛的技术之一,有机和无机分子的量化。色谱法是一种有机分子的分离的技术。用连字符连接仪表技术说(HPLC-UV /质/ LC-NMR)是一个乐器的技术协调输出异常输入异常的其他工具。下缘或传统仪器说紫外线/荧光/红外作为探测器在高端或用连字符连接仪表技术(HPLC-UV /质/ LC-NMR)说。高效液相色谱法是分子的分离技术(μg-ng /毫升)在较短的时间。各种文献报道的高效液相色谱方法可同时估计扑热息痛和布洛芬单独或结合其他API,但很少直接同步估计的高效液相色谱方法对乙酰氨基酚、布洛芬和咖啡因根据我们的知识。我们雇佣的标准添加法标准API的内部标准纳入量化。
紫外分析API的
作为当前研究工作执行与高效液相色谱紫外检测器(双波长检测器),我们进行光谱扫描对所有感兴趣的API的单独和同时。我们的目标是识别一个isobestic点(波长的所有API的常见的吸光度)。使用紫外线Isobestic点的识别光谱学在HPLC-UV波长选择的标准。API的紫外扫描对乙酰氨基酚、布洛芬和咖啡因(吸收最大值作为波长的函数)1数据。和2isobestic点被发现203海里。同样的波长选择HPLC-UV (LC-20-AD)。
图1:吸光度maxima是波长的函数。
图2:吸收咖啡因和isobestic点的最大值。
高效液相色谱方法开发
流动相的选择
移动阶段,没有缓冲的各种组合在不同pH值从2 - 8,更强调最后的pH值调整流动相±2单位的pka API的价值。流动相的各种组合突出显示在表。
列或固定相的选择
各种静止阶段(列)当前研究筛选最合适列对尾矿因素和理论板块,最终ODS海波西尔C18选择进行分析。
材料、试剂和化学物质
对乙酰氨基酚、布洛芬和咖啡因纯药物得到礼物样本太阳制药瓦尔道拉Sparc研究中心。其他化学物质如甲醇、乙腈和milli-Q水域采购从毫BSRC孔隙水系统可用。平板电脑剂型imol +采购从当地市场2]。
仪表
紫外线仪器由岛津制作所的紫外线,酸度计,毫毛孔水净化系统。日本岛津公司的高效液相色谱系统由LC 20广告,汉密尔顿喷射器20μl能力和探测到SPD-20A紫外检测器与LC-Solutions软件。使用的固定相是ODS-Hypersil-C18逆转阶段。
色谱条件
流动相由乙腈:水(挺)pH值调整到2.8,分析中所使用的溶剂都是透过0.45μ缝匠肌滤纸,ultra-sonication 10分钟。脱气的流量保持在0.3毫升/分钟。整除的样品(20μl)(注入体积)注入和总运行保持在20分钟色谱监测在203海里。
标准解决方案和校准曲线
标准的股票解决方案的药物是由溶解10毫克纯药物在100毫升的流动相。连续稀释制成股票解决方案使用乙腈。
样品制备
十片扑热息痛,布洛芬和咖啡因是称重和在研钵和研杵磨成细粉。粉的质量相当于100毫克的扑热息痛,布洛芬和咖啡因是准确称重和转移到容量瓶含有乙腈。最终的解决方案是用5分钟和尼龙过滤器和过滤体积是使用乙腈100毫升。从连续稀释股票制定解决方案,分析了他们的恢复研究[3]。
方法验证
该方法验证根据我以下参数的准则。乐动KENO快乐彩
线性度和灵敏度
扑热息痛的标准解决方案,布洛芬和咖啡因准备5μg /毫升的浓度范围25μg /毫升。然后20μl每个解决方案都注入了一式三份的列和上述色谱是利用流动相乙腈:水(挺)pH值调整到2.8比率。RF值绘制与相应的浓度来获得校准图表。LOD和定量限计算基于方程:LOD = 3.3×A / B和定量限= 10×A / B。在那里,SD的峰值区域吗药物作为一个衡量噪声和B是相应的校准曲线的斜率图。3- - - - - -5。
图3:色谱扑热息痛的扑热息痛线性图。
图4:色谱图的布洛芬布洛芬的线性图。
图5:色谱的咖啡因咖啡因的线性图。
精度
盘中interday和精度进行了研究,使用三个不同浓度的标准(初期、中期和最终浓度)一式三份一天,连续三天。
精度
方法检查的准确性通过执行恢复使用标准添加法研究一式三份(50%、100%和150%)。准确已知数量的样本添加到一个已知数量的pre-analyzed平板粉和分析(表1)。
| 参数 | 对乙酰氨基酚 | 布洛芬 | 咖啡因 |
|---|---|---|---|
| 保留时间(Rt) | 9.7 | 12.66 | 10.48 |
| 线性范围(µg /毫升) | 1.25µg /毫升20µg /毫升 | 0.625µg /毫升10µg /毫升 | 0.625µg /毫升10µg /毫升 |
| 回归方程 | y = x + 11807 61963 | y = x + 77914 31198 | y = x + 42403 59842 |
| 检测极限(µg /毫升) | 0.28481225 | 0.187937934 | 0.264438458 |
| 量化的限制(µg /毫升) | 0.94937417 | 0.626459779 | 0.881461526 |
| 回归系数(r2) | 0.999 | 0.999 | 0.999 |
表1。线性参数校准曲线。
| 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 浓缩的。 | 标准偏差 | 峰面积 | 浓缩的。 | 标准偏差 | 峰面积 | 浓缩的。 | 标准偏差 |
| 888147年 | 1.25 | 0.69258 | 783034年 | 1.25 | 0.442707 | 470798年 | 1.25 | 0.692588 |
| 1659642 | 2.5 | 0.53228 | 1527003 | 2.5 | 0.69224431 | 869036.667 | 2.5 | 0.53228782 |
| 3197167 | 5 | 0.36195 | 3035632 | 5 | 0.709403 | 1645744 | 5 | 0.361959 |
n = 3
表1。准确性。
| S.no | 天内旋进 | 国米天旋进 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 对乙酰氨基酚 | 布洛芬 | 咖啡因 | 对乙酰氨基酚 | 布洛芬 | 咖啡因 | |
| 1 | 6385180 | 3189497 | 5990397 | 6385180 | 3189497 | 5990397 |
| 2 | 6394967 | 3179829 | 6011626 | 6394967 | 3179829 | 6011626 |
| 3 | 6498615 | 3218876 | 6057253 | 6498615 | 3218876 | 6057253 |
| 4 | 6401950 | 3184222 | 6014400 | 6400632 | 3186556 | 5960127 |
| 5 | 6342337 | 3204056 | 5944931 | 6366615 | 3256463 | 5917302 |
| 6 | 6400594 | 3223011 | 5978122 | 6394706 | 3199781 | 5987988 |
| AVG | 6403941 | 3199915.167 | 5999455 | 6406786 | 3205167 | 5987449 |
| SD | 51392.4 | 18266.60881 | 38005.54 | 46554.44 | 28573.27 | 47187.29 |
| 标准偏差 | 0.802512 | 0.570846659 | 0.633483 | 0.726643 | 0.891475 | 0.788103 |
n = 3
表1 b。精度。
鲁棒性
鲁棒性方法的决心通过引入小流动相组成的变化,流量和检测波长的变化。在初始发展阶段的方法,该方法受到微小的变化和小的变化的影响方法的检测对乙酰氨基酚、布洛芬和咖啡因对峰的形状,RT值和稳定性进行了研究(表2 - 5)。
| 移动 阶段 |
流 | 理论板 | 拖尾因子 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| AVG | 方差 | 标准偏差 | AVG | 方差 | 标准偏差 | ||
| 90:10 | 0.5 | 12323.978 | 56.20974539 | 0.456100663 | 0.93933333 | 0.00305505 | 0.325236032 |
| 90:10 | 0.7 | 9067.419667 | 78.84922682 | 0.869588369 | 0.888 | 0.00953939 | 1.074255857 |
| 88:12 | 0.5 | 15478.77167 | 135.7386882 | 0.876934495 | 0.99166666 | 0.00709459 | 0.715421736 |
| 88:12 | 0.7 | 11609.59933 | 154.6095267 | 1.331738695 | 1.021 | 0.00754983 | 0.739454891 |
| 92:08年 | 0.5 | 5950.82 | 40.23684315 | 0.67615628 | 0 | 0 | 0 |
| 92:08年 | 0.7 | 4445.731 | 49.73684297 | 1.118755115 | 0 | 0 | 0 |
表2。鲁棒性研究扑热息痛。
| 移动 阶段 |
流 | 理论板 | 拖尾因子 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| AVG | 方差 | AVG | 方差 | ||||
| 90:10 | 0.5 | 12864.37067 | 116.9338918 | 90:10 | 0.5 | 12864.37067 | 116.9338918 |
| 90:10 | 0.7 | 11470.76967 | 130.9244533 | 90:10 | 0.7 | 11470.76967 | 130.9244533 |
| 88:12 | 0.5 | 14257.88433 | 209.0422122 | 88:12 | 0.5 | 14257.88433 | 209.0422122 |
| 88:12 | 0.7 | 12586.42633 | 104.8210764 | 88:12 | 0.7 | 12586.42633 | 104.8210764 |
| 92:08年 | 0.5 | 12718.54433 | 71.83204801 | 92:08年 | 0.5 | 12718.54433 | 71.83204801 |
| 92:08年 | 0.7 | 11747.39667 | 135.0314692 | 92:08年 | 0.7 | 11747.39667 | 135.0314692 |
表3。布洛芬的健壮性参数。
| 移动 阶段 |
流 | 理论板 | 拖尾因子 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| AVG | 方差 | 标准偏差 | AVG | 方差 | 标准偏差 | ||
| 90:10 | 0.5 | 15841.41867 | 104.1076266 | 0.657186258 | 1.31 | 0.007549834 | 0.576323239 |
| 90:10 | 0.7 | 12461.14467 | 201.2005414 | 1.614623269 | 1.361 | 0.02433105 | 1.787733293 |
| 88:12 | 0.5 | 16618.58767 | 209.3578273 | 1.259781105 | 1.2573 | 0.011590226 | 0.921810109 |
| 88:12 | 0.7 | 13637.39533 | 201.6091045 | 1.478354918 | 1.324 | 0.012529964 | 0.94637191 |
| 92:08年 | 0.5 | 14483.07133 | 84.91817942 | 0.58632715 | 0 | 0 | 0 |
| 92:08年 | 0.7 | 12089.129 | 67.05188783 | 0.554646144 | 0 | 0 | 0 |
表4。鲁棒性参数的咖啡因。
| 强度研究扑热息痛 | 强度研究布洛芬 | 强度研究咖啡因 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| S.NO | Analysit-1 | 分析人员2 | 分析人员1 | 分析人员2 | 分析人员1 | 分析人员2 | |
| 1 | 峰面积 | 3208599 | 3240878 | 1641232 | 1686064 | 3051201 | 3020092 |
| 2 | 峰面积 | 3193454 | 3148553 | 1652496 | 1699056 | 3044639 | 3116484 |
| 3 | 峰面积 | 3189449 | 3238949 | 1643503 | 1681409 | 3011056 | 3097548 |
| AVG | 3197167 | 3209460 | 1645744 | 1688843 | 3035632 | 3078041 | |
| 方差 | 10100.61 | 52755.83 | 5956.917 | 9145.834 | 21534.85 | 51070.9 | |
| 标准偏差 | 0.315924 | 1.64376 | 0.361959 | 0.541544 | 0.709403 | 1.659201 | |
表5所示。强度:
结果与讨论
产物的优化方法
各种溶剂系统进行评估来获得更好的色谱图。最初,甲醇,高效液相色谱级水、醋酸缓冲,乙腈和磷酸盐缓冲被试在不同的比率(4]。但该决议并不令人满意。最后,组成的流动相乙腈:水(挺)发现最佳pH值调整到2.8。
线性度和灵敏度
线性评估通过确定6工作标准的解决方案包含5μg /毫升到25μg /毫升的扑热息痛,布洛芬在一式三份具有良好的相关系数和咖啡因浓度范围。(r = 0.989)。LOD和定量限被发现分别0.0532μg /毫升和2.344μg /毫升6位数。- - - - - -8。
图6:色谱没有与基线校正基线校正。
图7:没有内部标准色谱色谱内标。
图8:制定的标准分析色谱的色谱分析。
分析
扑热息痛,布洛芬和咖啡因现在每片是通过比较峰面积计算,与内部标准。
选择和内部标准的角色
传统量化技术进行一个错误,尽量减少误差分析、恢复和量化的API是对内部标准方法完成的。选择标准的内部标准;结构相似的化合物也有类似的保留时间,双氯芬酸作为内标(5]。(使用线性和回归传统的量化技术是过时的和携带一定数量的随机误差。内部标准分析随身携带整个分析标准数量的决定性的错误。
API是用化学的结构。画ultra 10
测定方法
复苏的实验
研究的准确性,该方法的重复性和精度恢复实验。一个固定数量的pre-analyzed样本和标准在三种不同浓度药物的加入,每个层次重复3次。经济复苏(估计超过100%6]。
验证产物梯度估计方法对乙酰氨基酚、咖啡因和布洛芬
固定相:C18250毫米×4.6毫米,5μ,Inertsil ODS 3 v。
流动相:6.8通用KH2阿宝41 l Milli-Q水pH值调整到3磷酸
流动相乙:过滤和脱气乙腈(高效液相色谱级)。
检测器:在波长230纳米的紫外线。
流量:1毫升/分钟(运行时间30分钟)
注入体积:20μl
模式:梯度
洗脱顺序:对乙酰氨基酚、咖啡因和布洛芬。
保留时间:对乙酰氨基酚、咖啡因和布洛芬是6,8 - 17分钟(表6),9的数字。和10。
图9:对乙酰氨基酚的高效液相色谱(梯度)色谱图、布洛芬和咖啡因。
图10:对乙酰氨基酚的高效液相色谱(权力平等主义的)色谱,布洛芬和咖啡因。
| 时间 | KH2阿宝4缓冲p3.0 H | 乙腈 |
|---|---|---|
| 0.01 | 85年 | 15 |
| 5 | 85年 | 15 |
| 12 | 25 | 75年 |
| 20. | 25 | 75年 |
| 22 | 85年 | 15 |
| 30. | 85年 | 15 |
表6所示。梯度编程。
准备样品和标准股票解决方案A:称量准确的对乙酰氨基酚130毫克,16毫克咖啡因,和80毫克布洛芬50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释5毫升到100毫升甲醇(6]。
标准股票解决方案B:准确称量136.5毫克的扑热息痛,16.8毫克咖啡因,和84毫克布洛芬50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释5毫升到100毫升甲醇。
样本股票解决方案:二十个平板电脑重量准确,细粉。粉相当于1片摄于50 ml容量瓶,甲醇添加,用了20分钟,冷却,进一步用甲醇稀释到马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。然后0.45μ膜过滤器过滤。
扑热息痛的安慰剂:准确称量0.135通用的安慰剂50毫升容量瓶。添加16毫克咖啡因,80毫克布洛芬和足够的甲醇,用了20分钟,冷却和稀释与甲醇的马克。上述解决方案进一步稀释5毫升100毫升甲醇。然后0.45μ膜过滤器过滤。
安慰剂咖啡因:准确称量0.135通用的安慰剂50毫升容量瓶。增加对乙酰氨基酚130毫克,80毫克布洛芬和足够的甲醇,用了20分钟,冷却和稀释与甲醇的马克。上述解决方案进一步稀释5毫升100毫升甲醇。然后0.45μ膜过滤器过滤。
布洛芬的安慰剂:准确称量0.135 g的安慰剂50毫升容量瓶。添加130毫克扑热息痛,16毫克咖啡因和足够的甲醇,用近20分钟,冷却和稀释与甲醇的马克。上述解决方案进一步稀释5毫升100毫升甲醇。然后0.45μ过滤膜过滤器(表7 - 10)。
| 样品名称 | 峰面积 对乙酰氨基酚 |
保留时间 | 区域 咖啡因 |
保留时间 | 峰面积的布洛芬 | 保留时间 | 相似性系数 对乙酰氨基酚、布洛芬、咖啡因 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 性病的 | 7557233 | 6.32 | 564849年 | 8.54 | 2016114 | 17.58 | |
| 性病的 | 7580906 | 6.31 | 566807年 | 8.53 | 2020175 | 17.57 | |
| 性病的 | 7588646 | 6.31 | 567043年 | 8.52 | 2022898 | 17.57 | |
| 性病的 | 7587502 | 6.31 | 567267年 | 8.52 | 2021357 | 17.57 | |
| 性病的 | 7584143 | 6.30 | 566700年 | 8.49 | 2019249 | 17.57 | |
| 性病的 | 75944237 | 6.30 | 567367年 | 8.49 | 2021417 | 17.56 | |
| 性病B | 7568881 | 6.31 | 565933年 | 8.50 | 2016610 | 17.56 | 0.98 |
| 标准偏差 | 0.17% | 0.11% | 0.16% | 0.22% | 0.12% | 0.03% |
表7所示。扑热息痛的特异性测试数据。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| 理论板 | 壮年的2000 | 7771年 | 10581年 | 135129年 |
| 拖尾因子 | NMT 2 | 1。0 | 1。1 | 1。1 |
| 能力因素 | 壮年的2 | 1。5 | 2.4 | 6.0 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 0.98 | 0.98 | 0.98 |
| %为性病的区域 | NMT 2 | 0.17% | 0.16% | 0.12% |
| %为STD RT | NMT 2 | 0.11% | 0.22% | 0.03% |
| % RSD为性病的区域 | NMT 2 | 0.17% | 0.18% | 0.20% |
| % RSD为性病的保留时间 | NMT 2 | 0.11% | 0.22% | 0.04% |
给定的特定方法。
表8。系统适用性。
| 样品名称 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 区域 | 量 毫克/选项卡 |
%的标签要求 | 区域 | 量 毫克/选项卡 |
%的标签要求 | 区域 | 量 毫克/选项卡 |
%的标签要求 | |
| 1 | 7402044 | 318.8 | 98.1 | 550272年 | 39.4 | 98.6 | 2019414 | 200.1 | 100.1 |
| 2 | 7424325 | 319.8 | 98.4 | 552223年 | 39.6 | 99.0 | 2026164 | 200.8 | 100.4 |
| 3 | 7437356 | 320.5 | 98.6 | 553173年 | 39.7 | 99.2 | 2028301 | 201.1 | 100.6 |
| 4 | 7485967 | 322.8 | 99.3 | 554184年 | 39.8 | 99.4 | 2033877 | 201.8 | 100.9 |
| 5 | 7550710 | 325.6 | 100.2 | 558013年 | 40.1 | 100.1 | 2042587 | 202.7 | 101.4 |
| 6 | 7552770 | 325.2 | 100.1 | 557624年 | 40 | 99.9 | 2042212 | 202.3 | 101.2 |
| SD | 2.881 | 0.886 | 0.229 | 0.573 | 0.972 | 0.486 | |||
| %相对标准偏差 | 0.89 | 0.89 | 0.58 | 0.58 | 0.48 | 0.48 | |||
表9所示。重复性的扑热息痛布洛芬和咖啡因。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| %为试验 | NMT 2 | 0.89 | 0.58 | 0.48 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 0.98 | 0.98 | 0.98 |
表10。总结可重复性。
线性
标准溶液(50%):准确称量32.50毫克的扑热息痛,4.02毫克咖啡因,布洛芬和21.0毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(60%):准确称量39.3毫克的扑热息痛,4.83毫克咖啡因,布洛芬和25.5毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(80%):准确称量52.80毫克的扑热息痛,46.42毫克咖啡因,布洛芬和34.1毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(100%):准确称量64.90毫克的扑热息痛,8.06毫克咖啡因,布洛芬和40.5毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(120%):准确称量77.30毫克的扑热息痛,9.62毫克咖啡因,布洛芬和48.5毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(140%):准确称量90.0毫克的扑热息痛,11.18毫克咖啡因,布洛芬和56.5毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(150%):准确称量32.50毫克的扑热息痛,4.02毫克咖啡因,布洛芬和21.0毫克到50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释到马克与甲醇(7]。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇(表11日至20日)。
| 样品名称 | 水平 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 浓缩的。 | 响应因子 | 峰面积 | 浓缩的。 | 响应因子 | 峰面积 | 浓缩的。 | 响应因子 | ||
| 1 | 50% | 64188年 | 64.80 | 59372.5 | 4731年 | 8.01 | 35378.8 | 17414年 | 41.92 | 24958.2 |
| 2 | 60% | 77398年 | 78.36 | 59118.8 | 5712年 | 9.63 | 35481.5 | 20893年 | 50.90 | 24582.5 |
| 3 | 80% | 103953年 | 105.28 | 59075.1 | 7684年 | 12.80 | 35888.8 | 27871年 | 68.07 | 24504.7 |
| 4 | 100% | 127640年 | 129.41 | 59158.1 | 9468年 | 16.07 | 35319.7 | 34086年 | 80.84 | 25257.3 |
| 5 | 120% | 152373年 | 154.13 | 59279.0 | 11336年 | 19.19 | 35405.6 | 40589年 | 96.81 | 25130.7 |
| 6 | 140% | 177636年 | 179.46 | 59290.9 | 13263年 | 22.30 | 35612.5 | 47167年 | 112.78 | 25049.0 |
| 7 | 150% | 189707年 | 192.02 | 59194.8 | 14203年 | 24.07 | 35291.7 | 50228年 | 119.77 | 25123.2 |
| SD | 105.75 | 208.79 | 288.66 | |||||||
| %相对标准偏差 | 0.18% | 0.59% | 1.16% | |||||||
表11所示。线性强化各级的API。
| 的名字 | % Y轴截距 | 相关系数 | 响应因子(%相对标准偏差) |
|---|---|---|---|
| 对乙酰氨基酚 | -0.1 | 1.000 | 1.18% |
| 咖啡因 | 0.4 | 1.000 | 0.59% |
| 布洛芬 | -1.6 | 1.000 | 1.16% |
| 验收 | 2 + 2 | 壮年的0.99 | NMT 5% |
表12。摘要线性。
| 样品名称 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | |
| 1 | 7406357 | 326.6 | 100.5 | 552989年 | 39.9 | 99.8 | 2073280 | 199.8 | 99.9 |
| 2 | 7338309 | 323.4 | 99.5 | 552303年 | 39.9 | 99.7 | 2077918 | 200.2 | 100.1 |
| 3 | 7360016 | 324.4 | 99.8 | 553631年 | 40 | 99.9 | 2084750 | 200.8 | 100.4 |
| SD | 1.61 | 0.49 | 0.04 | 0.12 | 0.51 | 0.25 | |||
表13。鲁棒性(低pH值)。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| %的标签要求 | 95%到105% | 99.9 | 99.8 | 100.1 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 0.99 | 0.98 | 1.01 |
表14。总结鲁棒性(低pH值)。
| 样品名称 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | |
| 1 | 7364772 | 321.1 | 98.8 | 554575年 | 40 | 100.0 | 2046088 | 200.8 | 100.4 |
| 2 | 7400597 | 322.8 | 99.3 | 555880年 | 40.1 | 100.3 | 2055765 | 201.9 | 100.9 |
| 3 | 7369187 | 321.6 | 99.0 | 554293年 | 40 | 100.1 | 2045168 | 201年 | 100.5 |
| SD | 0.86 | 0.26 | 0.05 | 0.14 | 0.56 | 0.28 | |||
| 标准偏差 | 0.27 | 0.27 | 0.15 | 0.15 | 0.28 | 0.28 | |||
表15。鲁棒性(高pH值)。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| %的标签要求 | 95%到105% | 99.0 | 100.1 | 100.6 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 1.00 | 0.99 | 1.00 |
表16所示。总结鲁棒性(高pH值)。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| %的标签要求 | 95%到105% | 99.4 | 99.0 | 99.0 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 0.98 | 0.98 | 1.00 |
表17所示。总结健壮性(低流量)。
| 样品名称 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | ||
| 1 | 8197386 | 323.5 | 99.5 | 617630年 | 39.7 | 99.3 | 2282308 | 198.6 | 99.3 | |
| 2 | 8172205 | 322.2 | 99.1 | 615123年 | 39.5 | 98.8 | 2273102 | 197.6 | 98.8 | |
| 3 | 8184580 | 323年 | 99.4 | 615999年 | 39.6 | 99.0 | 2275068 | 197.9 | 99.0 | |
| SD | 0.66 | 0.20 | 0.10 | 0.25 | 0.50 | 0.25 | ||||
| 标准偏差 | 0.20 | 0.20 | 0.25 | 0.25 | 0.26 | 0.26 | ||||
表18。鲁棒性(低流量)。
| 样品名称 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | ||
| 1 | 6668504 | 322.6 | 99.3 | 498142年 | 39.6 | 99.0 | 1837498 | 198.6 | 99.3 | |
| 2 | 6673044 | 322.9 | 99.4 | 498715年 | 39.7 | 99.2 | 1838632 | 198.8 | 99.4 | |
| 3 | 6639102 | 321.3 | 98.9 | 496605年 | 39.5 | 98.7 | 1831277 | 198年 | 99.0 | |
| SD | 0.84 | 0.26 | 0.08 | 0.20 | 0.40 | 0.20 | ||||
| 标准偏差 | 0.26 | 0.26 | 0.21 | 0.21 | 0.20 | 0.20 | ||||
表19。鲁棒性(高流量)。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| %的标签要求 | 95%到105% | 99.2 | 99.0 | 99.2 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 0.98 | 0.98 | 0.98 |
表20。总结健壮性(高流量)。
精度
需求
标准溶液(恢复50%的水平):准确称量162.5毫克的扑热息痛,20毫克咖啡因,和100毫克布洛芬50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇。
标准溶液(恢复100%的水平):称量准确的对乙酰氨基酚325毫克,40毫克咖啡因,和200毫克布洛芬50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇(8]。
标准溶液(恢复150%的水平):准确称量487.5毫克的扑热息痛,60毫克咖啡因,300毫克布洛芬50毫升容量瓶。添加足够的甲醇,用溶解,冷却和稀释与甲醇的马克。上面的股票解决方案是进一步稀释2毫升100毫升甲醇(表21 - 25日)。
| 水平 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | 峰面积 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | |
| 50% | 3816748 | 101年 | 0.22 | 288181年 | 103年 | 0.73 | 1050819 | 101年 | 0.12 |
| 100% | 7573648 | 99年 | 0.14 | 562381年 | One hundred. | 0.31 | 2035228 | 101年 | 0.08 |
| 150% | 11261934 | 99年 | 0.03 | 839915年 | One hundred. | 0.15 | 2991330 | 99年 | 0.17 |
表21。复苏的扑热息痛,咖啡因和布洛芬。
| 参数 | 验收标准 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| 恢复50% | 98%到102% | 101年 | 103年 | 101年 |
| 恢复100% | 98%到102% | 99年 | One hundred. | 101年 |
| 恢复150% | 98%到102% | 99年 | One hundred. | 99年 |
| %为复苏 | NMT 2 | 0.03 | 0.15 | 0.17 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 1.00 | 0.99 | 1.00 |
表22。总结的准确性。
| 样品名称 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 峰面积 | 浓缩的。 | 响应因子 | 峰面积 | 浓缩的。 | 响应因子 | 峰面积 | 浓缩的。 | 响应因子 | |
| 1 | 6960251 | 320.8 | 98.7 | 544569年 | 39.7 | 99.2 | 544569年 | 39.7 | 99.2 |
| 2 | 7113910 | 323.7 | 99.6 | 550444年 | 39.6 | 99.0 | 550444年 | 39.6 | 99.0 |
| 3 | 6944705 | 319.3 | 98.2 | 543543年 | 39.5 | 98.8 | 543543年 | 39.5 | 98.8 |
| 4 | 7138815 | 324.8 | 99.9 | 552295年 | 39.7 | 99.3 | 552295年 | 39.7 | 99.3 |
| 5 | 7117815 | 323.8 | 99.6 | 550579年 | 39.6 | 99.0 | 550579年 | 39.6 | 99.0 |
| 6 | 6931597 | 319年 | 98.2 | 543636年 | 39.6 | 98.9 | 543636年 | 39.6 | 98.9 |
| SD | 2.51 | 0.77 | 0.07 | 0.19 | 0.07 | 0.19 | |||
| %相对标准偏差 | 0.78 | 0.78 | 0.20 | 0.20 | 0.20 | 0.20 | |||
表23。中间扑热息痛的精确数据,布洛芬和咖啡因。
| 参数 | 验收 | 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 |
|---|---|---|---|---|
| %为试验 | NMT 2 | 0.78 | 0.20 | 0.18 |
| %的变化 | NMT2 | 0.1 | 0.3 | 1。5 |
| 相似性系数 | 0.98到1.02 | 0.98 | 0.99 | 1.00 |
表24。摘要中间精密度(强度)。
| 对乙酰氨基酚 | 咖啡因 | 布洛芬 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 区域 | 毫克/选项卡 | % 标签 索赔 |
% 相对 不同 |
区域 | 毫克/选项卡 | % 标签要求 |
% 相对 不同 |
区域 | 毫克/标签数量 | %的标签要求 | % 相对 不同 |
||
| 0 | 7411567 | 322.6 | 99.3 | 0.0 | 553845年 | 39.4 | 98.6 | 0.0 | 2052065 | 201.2 | 100.6 | 0.0 | |
| 2 | 7436506 | 323.7 | 99.6 | 0.3 | 555885年 | 39.6 | 99.0 | 0.4 | 2069954 | 202.9 | 101.5 | 0.9 | |
| 4 | 7434897 | 323.6 | 99.6 | 0.3 | 555679年 | 39.6 | 98.9 | 0.3 | 2067476 | 202.7 | 101.3 | 0.8 | |
| 8 | 7445787 | 324.1 | 99.7 | 0.5 | 556076年 | 39.6 | 99.0 | 0.4 | 2067943 | 202.7 | 101.4 | 0.8 | |
| 12 | 7446004 | 324.1 | 99.7 | 0.5 | 556104年 | 39.6 | 99.0 | 0.4 | 2063880 | 202.3 | 101.2 | 0.6 | |
| 16 | 7419306 | 322.9 | 99.4 | 0.1 | 554280年 | 39.5 | 98.7 | 0.1 | 2058591 | 201.8 | 100.9 | 0.3 | |
| 20. | 7386753 | 321.5 | 98.9 | 0.3 | 552865年 | 39.4 | 98.4 | 0.2 | 2055739 | 201.5 | 100.8 | 0.2 | |
| 24 | 7461670 | 324.7 | 99.9 | 0.7 | 556740年 | 39.7 | 99.1 | 0.5 | 2063585 | 202.3 | 101.1 | 0.6 | |
表25。溶液稳定性的扑热息痛布洛芬和咖啡因。
正交分析
API的其他来源的需要以传统以及正交试验的如我所述Q6B [9]。额外的测试应该包括参数或方法来确定参考材料的适用性不一定被药物物质(例如,更广泛的跟踪相关物质杂质)。
结论
的切换两种不同的方法说权力平等主义的/梯度分析相同的感兴趣的分析物样品确保更大的分辨率与权力平等主义的梯度模式相比,也没有相对物质杂质检测到变异的方法确认样品的纯度和验证了方法根据我21 CFR指南和方法是健壮的权力平等主义的和梯度模式。乐动KENO快乐彩
引用
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